[发明专利]基于三通连接-核酸分子线路换能器的分子检测方法

权利要求书

1.基于三通连接-核酸分子线路换能器的分子检测方法，其特征在于，在一步链置换核酸分子线路法检测中，所述方法包括以下步骤：

(1)：由目标核苷酸和传导探针制备分子引发剂；

(2)：将核酸分子线路的各组分分别进行退火处理；

所述核酸分子线路为OSD核酸分子线路，其组分包括受体探针、OSD-F探针和OSD-Q探针；

(3)：将分子引发剂和核酸分子线路的各组分混合加热；

(4)：检测荧光信号，获得荧光检测曲线；

所述目标核苷酸为核酸等温扩增产物中的特定线性单链或环型单链核苷酸，包含α域和β域；所述传导探针为单链核苷酸，包含与β域碱基互补的可变域β*域和固定域2-3域；

所述受体探针包含与目标核苷酸的α域碱基互补的可变域α*域、与传导探针的固定域2-3域碱基互补的固定域2*-3*域和固定域4*域；

所述OSD-F探针依次包括与受体探针固定域2*-3*域碱基互补的固定域2-3域和3’端FAM；

所述OSD-Q探针依次包括与受体探针固定域4*域碱基互补的固定域4域和5’端BHQ1。

2.根据权利要求1所述的基于三通连接-核酸分子线路换能器的分子检测方法，其特征在于，在一步链置换核酸分子线路法检测中，若检测目标核苷酸为一种，检测流程为终点检测，所述方法包括以下步骤：

(1)将目标核苷酸和传导探针混合在1×TNak缓冲液中，在95℃下退火5min，0.1℃/s下缓慢降到室温，形成分子引发剂；

(2)将受体探针、OSD-F探针和OSD-Q探针混合在1×TNak缓冲液中，并加入终浓度为2μM的(dT)₂₁，在95℃下退火5min，然后在0.1℃/s下缓慢降到室温；

(3)将分子引发剂、受体探针、OSD-F探针和OSD-Q探针等体积混合，加热到55℃保持2～3小时；

(4)检测荧光信号，每2分钟采一点，获得荧光检测曲线。

3.根据权利要求1所述的基于三通连接-核酸分子线路换能器的分子检测方法，其特征在于，在一步链置换核酸分子线路法检测中，若检测目标核苷酸为一种，检测流程为实时检测，所述方法包括以下步骤：

(1)制备目标核苷酸的等温扩增引物混合液；

(2)将受体探针、OSD-F探针和OSD-Q探针混合在1×TNak缓冲液中，在95℃下退火5min，然后在0.1℃/s下缓慢降到室温；

(3)将受体探针、OSD-F探针和OSD-Q探针等体积混合在1×TNak缓冲液中，并加入传导探针与目标核苷酸的等温扩增引物混合液，再加入Bst2.0聚合酶，55℃保持4～5小时；

(4)检测荧光信号，每2分钟采一点，获得荧光检测曲线。

4.基于三通连接-核酸分子线路换能器的分子检测方法，其特征在于，在双发卡催化自组装多步核酸分子线路法检测中，所述方法包括以下步骤：

(1)：由目标核苷酸和传导探针制备分子引发剂；

(2)：将核酸分子线路各组分分别进行退火处理；

所述核酸分子线路为CHA核酸分子线路，其组分包括H1、H2、CHA-F探针和CHA-Q探针；

(3)：将分子引发剂和核酸分子线路各组分混合加热；

(4)：检测荧光信号，获得荧光检测曲线；

所述目标核苷酸为核酸等温扩增产物中的特定线性单链或环型单链核苷酸，包含α域和β域；所述传导探针为单链核苷酸，包含与β域碱基互补的可变域β*域和固定域2-3域；

所述H1依次包含与目标序列可变域α域碱基互补的可变域α*域、发卡结构固定域2*-3*-4-3-2和固定域5-6，其中2*-3*和3-2为碱基互补区域；

所述H2依次包含与H1碱基固定域碱基互补的固定域3*和发卡结构固定域4*-3-2-4域，其中4和4*为碱基互补区域；

所述CHA-F探针依次包括5’端FAM、与H1中的2-5-6碱基互补的固定域6*-5*-2*；

所述CHA-Q探针依次包括与CHA-F探针中的6*-5*碱基互补的5-6和3’端BHQ1。