[发明专利]活化转录HSP70的NS31基因的编码序列的应用在审
| 申请号： | 201711166465.4 | 申请日： | 2017-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN107904256A | 公开（公告）日： | 2018-04-13 |
| 发明（设计）人： | 吕利群;喻飞;王浩;李婉娟;王龙龙;孙皓 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C07K14/08 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司31227 | 代理人： | 曹莉 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 活化 转录 hsp70 ns31 基因 编码 序列 应用 | ||
1.活化转录HSP70的NS31基因的编码序列的应用，其特征在于：(1)将载体pEGFP-N1和NS31基因的编码序列分别利用Xho I/PstI限制内切酶进行双酶切，37℃，20-30min，进行DNA纯化，T4连接酶16℃连接18-20h，获得pEGFP-N1-NS31质粒；
(2)用步骤(1)中获得pEGFP-N1-NS31质粒转染真核细胞中，够诱导热休克蛋白HSP70转录活化，同时不会对HSC70和HSP90转录水平产生影响。
2.根据权利要求1所述的应用：其特征在于：所述步骤(1)中NS31基因的编码序列通过设计克隆引物进行RT-PCR从GCRV-JX01病毒感染的草鱼肾脏细胞中扩增出。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述克隆引物为：F:CCGCTCGAGATGAACGCCGACCGCACC；R:AAAACTGCAGCCAGCAACCATTGTCCATTAAC。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述PCR反应体系为：50μl体系中：ExTaq Buffer 5μl，dNTP 4μl，10mmol/L克隆引物正引物F 1-2μl，10mmol/L克隆引物正引物R 1-2μl,ExTaq酶0.1-0.3μl，ddH2O剩余；
所述PCR反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1-1.5min，30-35个循环；72℃补充延伸5min。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤(1)中的NS31基因的编码序列在Genbank的登录号为MG189638。
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