[发明专利]一种益生菌菌剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种益生菌菌剂的制备方法。

背景技术

益生菌是指能够改善宿主肠道菌群生态平衡，提高宿主健康水平和健康状态的活 菌制剂及其代谢产物。益生菌能够在数量和种类上补充肠道内减少或缺乏的正常微生物， 调整或维持肠道内微生物平衡，增强机体免疫功能，促进营养物质的消耗和吸收，从而达到防病治病的目地。益生菌包括枯草芽孢杆菌、粪链球菌、双歧杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、肠球菌、明串珠菌、片球菌、蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌以及酵母菌等。因此，益生菌在医药、农业、工业、食品和饲料等与人类生活密切相关的领域中发挥越来越重要的作用。

国内外的益生菌制剂的工业发酵中，通常采用单一菌株纯化发酵制成菌剂或由单一菌剂再复合而成，但是单一菌种研制成复合益生菌制剂，其在肠道微环境中也存在协同作用不好，相容性差等问题。因此，由单一菌剂发酵转向混菌发酵是国内外益生菌制剂的重要发展趋势，但目前混菌发酵的细菌大多由专性厌氧菌组成，通常是由两种或两种以上的肠道菌种通过混合厌氧发酵而成，这种混合厌氧发酵方式设备复杂，工艺繁琐，必须严格控制厌氧环境，制备成本高。

综上所述，目前国内对益生菌制剂的研究过程中，缺乏将需氧发酵和厌氧发酵相结合的混合发酵方法制备的益生菌制剂，即使将多个单一菌种研制成复合益生菌制剂，其在肠道微环境中也存在协同作用不好，相容性差、成本高等问题，除此之外，益生菌制剂在口服时，容易受到胃酸和胆汁的作用，在达到起效部位肠道之前活菌数会大幅度下降，从而影响益生菌产品的疗效或保健作用。

因此，我们有必要重新的研制出一款新型的益生菌制剂，以此来解决现如今市场上的益生菌制剂间所存在的问题，以此更好的适应于社会与有关行业的需求，这也将是一件十分有意义的事情。

发明内容

4.本发明所要解决的技术问题：针对目前益生菌制剂其在肠道微环境中协同作用不好，在口服时，容易受到胃酸和胆汁的作用，在达到起效部位肠道之前活菌数会大幅度下降，从而影响益生菌产品的疗效或保健作用的问题，提供一种益生菌菌剂的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：

一种益生菌菌剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

（1）取泡菜和酸奶加入生理盐水中，振荡，接种至分离琼脂平板上，厌氧培养，挑取菌径最大的菌落重复划线培养2~3次，得纯化培养菌株，将纯化培养菌株接种至种子培养基中，培养，将培养物接种至发酵培养基中，培养，干燥，粉碎过筛，得发酵物粉末，备用；

（2）取构树叶加入质量分数为50％的乙醇溶液混合，升温，超声提取，抽滤，取滤液，旋转蒸发，浓缩至膏状，取膏状物A加入石油醚萃取，调节pH至2~3，再加入石油醚质量分数50%的乙酸乙酯萃取，离心，取沉淀干燥，得构树叶提取物，备用；

（3）取野木瓜粉末加入质量分数为95%的乙醇，超声振荡，过滤，取滤液，将滤液减压浓缩至膏状，取膏状物B加入超纯水搅拌混合，用乙醚萃取3~4次，再用正丁醇萃取，合并萃取液，旋转蒸发，得野木瓜提取物，备用；

（4）按质量份数计，取70~100份步骤（1）备用的发酵物粉末，50~60份步骤（2）备用的构树叶提取物，40~50份野木瓜提取物，20~30份混合保护剂，20~35份海藻酸钠，20~25份碳酸钙，20~30份色拉油，8~12份吐温-80，乳化10~15min，得乳化液，向乳化液中加入冰醋酸，静置，离心，收集沉淀 ，-40℃预冻1~2h，解冻，冷冻干燥，得益生菌菌剂。

所述步骤（1）中分离液体培养基：按质量份数计，取5~8份牛肉膏、10~12份蛋白胨、3~5份氯化钠、1000份蒸馏水，pH7.2~7.4，121℃高压灭菌15~20min；分离琼脂培养基：分离液体培养基中其他组分不变，再加入分离液培养基质量1.8~2%的琼脂，即得；种子培养基：按质量份数计，取10~15份葡萄糖、8~10份酵母粉、3~5份蛋白胨、1~3份醋酸钠、0.02~0.05份硫酸镁、0.001~0.003份硫酸锰、0.001~0.004份硫酸亚铁、0.001~0.006份氯化钠、1000份蒸馏水，pH6.8~7.0，121℃高压灭菌15~20min；发酵培养基：种子培养基中其他组分不变，加入种子培养基质量1~2%的L-谷氨酸钠，即得。