[发明专利]一种益生菌菌剂的制备方法

权利要求书

1.一种益生菌菌剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

（1）取泡菜和酸奶加入生理盐水中，振荡，接种至分离琼脂平板上，厌氧培养，挑取菌径最大的菌落重复划线培养2~3次，得纯化培养菌株，将纯化培养菌株接种至种子培养基中，培养，将培养物接种至发酵培养基中，培养，干燥，粉碎过筛，得发酵物粉末，备用；

（2）取构树叶加入质量分数为50％的乙醇溶液混合，升温，超声提取，抽滤，取滤液，旋转蒸发，浓缩至膏状，取膏状物A加入石油醚萃取，调节pH至2~3，再加入石油醚质量分数50%的乙酸乙酯萃取，离心，取沉淀干燥，得构树叶提取物，备用；

（3）取野木瓜粉末加入质量分数为95%的乙醇，超声振荡，过滤，取滤液，将滤液减压浓缩至膏状，取膏状物B加入超纯水搅拌混合，用乙醚萃取3~4次，再用正丁醇萃取，合并萃取液，旋转蒸发，得野木瓜提取物，备用；

（4）按质量份数计，取70~100份步骤（1）备用的发酵物粉末，50~60份步骤（2）备用的构树叶提取物，40~50份野木瓜提取物，20~30份混合保护剂，20~35份海藻酸钠，20~25份碳酸钙，20~30份色拉油，8~12份吐温-80，乳化10~15min，得乳化液，向乳化液中加入冰醋酸，静置，离心，收集沉淀 ，-40℃预冻1~2h，解冻，冷冻干燥，得益生菌菌剂。

2.根据权利要求1所述的益生菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中分离液体培养基：按质量份数计，取5~8份牛肉膏、10~12份蛋白胨、3~5份氯化钠、1000份蒸馏水，pH7.2~7.4，121℃高压灭菌15~20min；分离琼脂培养基：分离液体培养基中其他组分不变，再加入分离液培养基质量1.8~2%的琼脂，即得；种子培养基：按质量份数计，取10~15份葡萄糖、8~10份酵母粉、3~5份蛋白胨、1~3份醋酸钠、0.02~0.05份硫酸镁、0.001~0.003份硫酸锰、0.001~0.004份硫酸亚铁、0.001~0.006份氯化钠、1000份蒸馏水，pH6.8~7.0，121℃高压灭菌15~20min；发酵培养基：种子培养基中其他组分不变，加入种子培养基质量1~2%的L-谷氨酸钠，即得。

3.根据权利要求1所述的益生菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中泡菜和酸奶与生理盐水的质量比为1：2：9；厌氧培养35~37℃厌氧培养2~3d；纯化培养菌株与种子培养基的质量比为1：50，培养条件为：30~33℃培养18~24h；培养物的接种量为5%，培养条件为：30~35℃培养2~3d。

4.根据权利要求1所述的益生菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中干燥的构树叶与质量分数为50％的乙醇溶液的质量比为1：20；膏状物与石油醚的质量比为1：5。

5.根据权利要求1所述的益生菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中干燥的野木瓜粉末与质量分数为95%的乙醇的质量比为1：10；膏状物B与超纯水的质量比为1：12。

6.根据权利要求1所述的益生菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中混合保护剂：按质量份数计，取玉米淀粉15~20份，菊粉30~40份，甘油100~120份混合，115℃灭菌10min。

7.根据权利要求1所述的益生菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中乳化液中与冰醋酸的质量比为20：1。