[发明专利]一种鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物及设计和扩增方法

权利要求书

1.通用引物在扩增鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2中的应用，其特征在于，所述通用引物包括：正向引物SEQ ID NO.1:5' - DACAACTCTTAGCGGTGGATCA - 3'，反向引物SEQID NO.2:5' - GCTCTTCCCTCTTCACTCG - 3'。

2.根据权利要求1所述的通用引物在扩增鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2中的应用，其特征在于，所述鲽形目鳎科鱼类包括但不限于：蛾眉条鳎、缨鳞条鳎、带纹条鳎、日本条鳎、东方箬鳎、眼斑豹鳎、圆鳞鳎、褐斑栉鳞鳎、角鳎、卵鳎、塞内加尔鳎和卡氏大鼻鳎。

3.一种如权利要求1所述的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的设计方法，其特征在于，从Genbank数据库中下载目前所有已经公布的鳎科鱼类5.8S rDNA和28SrDNA序列，对这些序列进行多重比对，分别在3’端和5’端找出比较保守的序列用于设计扩增ITS2的通用引物。

4.一种如权利要求1所述的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法，其特征在于，所述鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法包括以下步骤：

（1）DNA抽提试剂盒法提取鲽形目鳎科鱼类的总DNA；

（2）采用权利要求1中所述的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物；

（3）以待测鲽形目鳎科鱼类的总DNA作为模版，进行PCR扩增；

（4）扩增引物用1.0%琼脂糖凝胶电泳，试剂盒法割胶回收扩增片段，测序及序列拼接。

5.根据权利要求4所述的一种鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法，其特征在于，所述步骤（1）中为避免鲽形目鳎科鱼类肠道内容物污染，舍去其头颈部，只从其尾部提取DNA。

6.根据权利要求4所述的一种鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法，其特征在于，步骤（3）所述PCR扩增的反应体系组成为：2.5mM的dNTP2μL、10×TaqDNA聚合酶Buffer2.5μL、10μM的正向引物SEQ ID NO.1和反向引物SEQ ID NO.2各1μL、5U/μL的TaqDNA聚合酶0.2μL、100g/μL的DNA模版溶液1μL及灭菌双蒸水17.3μL；

所述PCR扩增条件为：95℃预变性5min，随后95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸60s，共进行35个循环，最后进行72℃延伸5min，4℃条件下保存。

7.根据权利要求4所述的一种鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法，其特征在于，所述待测的鲽形目鳎科鱼类包括但不限于：蛾眉条鳎、缨鳞条鳎、带纹条鳎、日本条鳎、东方箬鳎、眼斑豹鳎、圆鳞鳎、褐斑栉鳞鳎、角鳎、卵鳎、塞内加尔鳎和卡氏大鼻鳎。