[发明专利]一种乙酰基四肽-9的液相合成方法

说明书

本发明公开了一种乙酰基四肽‑9的液相合成方法，该方法是将两个片段Ac‑Gln(Trt)‑Asp(OtBu)‑OH和H‑Val‑His(Trt)‑OH缩合后脱保护而成，相比较逐个氨基酸缩合来延长肽链的方式，能有效的提高反应效率，采用乙酰基保护N端为起始原料，减少了最后N端的脱保护，整个过程中间体无需复杂纯化，可得到纯品较高的全保护四肽，相较于传统的固相合成，避免了高毒性溶剂的大量使用，成本低廉，易于规模化放大，经济效益明显。

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种四肽的液相合成方法。

背景技术

全球化妆品市场每年的销售量在不断地增长中，带来了颇具规模的经济效益，功能性肽类化妆品以其具有的抗衰、保湿、祛皱祛斑、美白、丰胸、减肥、生发等多重作用在近20年发展极其迅速，以每年20％～30％的速度不断增长。

乙酰基四肽-9，又称得美素(Dermican^TM)，其氨基酸序列为Ac-Gln-Asp-Val-His-OH，是一种新型的具有抗衰老、抗皱活性的寡肽。研究表明乙酰基四肽-9可以刺激人基膜聚糖(lumican)的合成和作用于胶原蛋白，作用于上皮细胞，可明显促进角质细胞的生长以及角质细胞的增厚，修复皮肤角质层，促进真皮重塑，达到紧致和丰满皮肤功效，能有效提高皮肤含水量。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种高效率、低成本、易规模化的乙酰基四肽-9的液相合成方法。

解决上述问题所采用的技术方案由下述步骤组成：

1、合成Ac-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-OH

将H-Gln(Trt)-OH溶于NaOH水溶液中，在0～5℃下加入乙酸酐，反应生成Ac-Gln(Trt)-OH。

以四氢呋喃为溶剂，将Ac-Gln(Trt)-OH、1-羟基苯并三唑、N,N′-二环己基碳二亚胺在0～10℃下反应生成活泼酯，然后在有机碱催化下与H-Asp(OtBu)-OH反应，生成Ac-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-OH。

2、合成H-Val-His(Trt)-OH

以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc-Val-OH与N,N′-二环己基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺在0～5℃下生成活泼酯，再与H-His(Trt)-OH、无机碱的水溶液反应生成Fmoc-Val-His(Trt)-OH；用哌啶-四氢呋喃脱除Fmoc-Val-His(Trt)-OH的Fmoc保护基，得到H-Val-His(Trt)-OH。

3、合成Ac-Gln-Asp-Val-His-OH

以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，将Ac-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-OH与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑在-5～0℃下反应生成活泼酯，然后在有机碱催化下与H-Val-His(Trt)-OH反应，生成Ac-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His(Trt)-OH；用切割液脱除Ac-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His(Trt)-OH的所有侧链保护基，分离纯化，得到Ac-Gln-Asp-Val-His-OH，即乙酰基四肽-9。

上述步骤1中，优选H-Gln(Trt)-OH与乙酸酐、NaOH的摩尔比为1:1.1～1.5:2.0～3.0，Ac-Gln(Trt)-OH、1-羟基苯并三唑、N,N′-二环己基碳二亚胺、H-Asp(OtBu)-OH、有机碱的摩尔比为1:1.1～1.5:1.3～1.6:1.0～1.3:3.0～4.0。

上述步骤2中，优选Fmoc-Val-OH、N-羟基丁二酰亚胺、N,N′-二环己基碳二亚胺、H-His(Trt)-OH、无机碱的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5:1.1～1.3:2～4。