[发明专利]直肠癌切除标本的切缘处胶原组织评价方法

说明书

本发明提供了一种直肠癌切除标本的切缘处胶原组织评价方法，涉及病理鉴别技术领域。本发明通过Masson染色结合多光子成像分析对直肠癌新辅助治疗后的直肠癌切除标本的切缘处胶原进行组织评价，有助于临床工作者了解患者直肠组织的局部纤维化程度及吻合口的愈合状况，从而为临床医生在术式选择及后续诊疗中提供参考，为患者提供更具个性化治疗方案，最终达到提高患者的生活质量、尽量避免严重并发症出现的目的。本发明设计合理，技术成熟，简便易行，具有广阔的临床应用前景和良好的科研推广价值。

技术领域

本发明涉及病理鉴别技术领域，尤其是涉及一种直肠癌切除标本的切缘处胶原组织评价方法。

背景技术

直肠癌是常见的消化道肿瘤之一，据世界卫生组织国际癌症研究中心(IARC)资料显示，2012年全世界约有136万直肠癌新发病例，位于肺癌、肝癌和胃癌之后，居恶性肿瘤第4位。近年来，随着直肠肿瘤现代治疗理念的不断深入，新辅助放化疗对局部中晚期直肠癌的疗效已得到肯定，新辅助放化疗(Neo-adjuvant chemoradiotherapy，Neo-CRT)指术前采取的放化疗措施。由于患者术前直肠肿瘤血供健全，乏氧肿瘤细胞少，对放疗敏感；新辅助放化疗可缩小肿瘤，使之降级、降期，增加完整切除率、尽最大可能增加保肛率。总体而言，新辅助放化疗可以使术后局部复发降低50％左右，因为这样的优势，新辅助放化疗近年来在我国也得到了广泛的推广应用。

但是，新辅助放化疗在降低直肠肿瘤局部复发率、提高保肛率、延长患者的生存期的同时，放化疗所造成的局部组织胶原增生，影响患者吻合口愈合，进而增加了患者术后出现吻合口狭窄、吻合口漏等并发症的可能。其中，吻合口漏表现为持续性高热、麻痹性肠梗阻、急性腹膜炎等症状，严重者可危及生命，是直肠癌时候常见的严重并发症，也是死亡的主要原因之一；吻合口狭窄往往造成病人排便不畅、便频，甚至产生急性闭袢性肠梗阻，降低患者的生存质量。而切缘处的胶原含量会直接影响到吻合口愈合，与术后是否出现上述并发症息息相关。

因此，研究开发出一种对直肠癌切除标本的切缘处胶原进行组织评价的方法，对获取患者直肠组织的结构信息和患者术后吻合口愈合状况以及评估患者术后是否可能出现严重并发症等均具有十分重要的意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种直肠癌切除标本的切缘处胶原组织评价方法，上述方法通过Masson染色结合多光子成像分析对直肠癌新辅助治疗后的直肠癌切除标本的切缘处胶原进行组织评价，有助于临床工作者了解患者直肠组织的局部纤维化程度及吻合口的愈合状况。

本发明提供的一种直肠癌切除标本的切缘处胶原组织评价方法，所述方法包括以下步骤：

(a)样本准备：将直肠癌切除标本的切缘处取出后进行常规蜡块制备，每一块组织中连续切取2～3张组织切片，取一张进行病理学Masson染色，制得Masson染色切片，剩余组织切片圈注组织粘膜下层后进行冷藏保存，作为待测多光子成像切片；

(b)Masson切片扫描：通过切片扫描仪对Masson染色切片进行整体切片成像，成像完毕后通过软件标注组织粘膜下层；

(c)标注成像区域：在普通光学显微镜下对Masson染色切片中组织粘膜下层符合直肠癌切除标本的切缘处胶原区域进行观察，并以标注的组织粘膜下层为基准，与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比，在待测多光子成像切片上标注对应区域，得到标注成像区域；

(d)多光子胶原成像：对步骤(c)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行二次谐波成像，得到多光子胶原成像图。

进一步的，所述步骤(a)中组织切片的厚度为3～8μm。

进一步的，所述步骤(a)中冷藏保存为-86℃冰箱保存。