[发明专利]早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法

说明书

本发明提供了一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法，涉及病理鉴别技术领域。本发明提供的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法通过染色切片结合多光子成像分析技术对早期胃癌癌旁胶原的多光子成像的形态学特征和纹理特征进行分析评价，及时发现早期胃癌肿瘤旁胶原变化情况，有助于临床工作者了解患者是否存在淋巴结转移的风险，从而为临床医生在术式选择及后续诊疗中提供参考，为患者提供更具个性化治疗方案，最终达到提高患者的生活质量，降低肿瘤复发的概率的目的。本发明设计合理，技术成熟，简便易行，具有广阔的临床应用前景和良好的科研推广价值。

技术领域

本发明涉及病理鉴别技术领域，尤其是涉及一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法。

背景技术

根据胃癌分类标准的定义，早期胃癌是指肿瘤细胞的侵犯局限在胃粘膜层或者粘膜下层，不论是否存在淋巴结转移。近年来，虽然在全世界范围内胃癌的整体发病率有所下降，但是早期胃癌的发病率却逐年升高。目前早期胃癌的治疗方式主要包括外科手术，即全胃或远端胃切除+淋巴结清扫，和内镜粘膜下切除术(ESD)。随着内镜技术的广泛应用，ESD已经逐渐替代外科手术，成为治疗早期胃癌的主流方式。

但是，目前早期胃癌患者中仍有约15％的病人存在淋巴结转移，肿瘤细胞淋巴结转移是早期胃癌患者行ESD的主要禁忌症，使得临床医生在做临床决策时更倾向于让早期胃癌患者接受外科手术，这一方面使无淋巴结转移的早期胃癌患者面临更大的手术风险，另一方面也降低了患者的生活质量。

研究显示，癌旁胶原的变化与胃癌淋巴结转移息息相关，及时发现癌旁胶原变化能对临床诊疗提供帮助，使存在淋巴结转移患者能接受手术治疗，降低后期复发风险，同时也使不存在淋巴结转移的病人通过内镜下治疗从而避免外科手术带来的风险，提高生活质量。

因此，研究开发出一种可以对早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织的微观结构进行观察评价的方法，进而能够快速、高效地反应癌旁胶原的变化情况，对临床医生判断患者是否存在淋巴结转移的评估提供参考，从而更好地选择治疗手段，在指导个性化诊疗方面具有重要意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法，上述方法通过染色切片结合多光子成像分析技术对早期胃癌切除标本的癌旁胶原进行组织评价，能够快速、高效地反应癌旁胶原的变化情况，有助于临床工作者了解患者是否存在淋巴结转移的风险。

本发明提供的一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法，所述方法包括以下步骤：

(a)样本准备：在早期胃癌标本的病变癌旁处连续切取3张组织切片进行常规蜡块制备，取1张进行苏木精-伊红染色，另1张进行病理学Masson染色，剩余1张进行冷藏保存，作为待测多光子成像切片；

(b)标注成像区域：在普通光学显微镜下对苏木精-伊红染色切片和Masson染色切片中符合早期胃癌癌旁胶原的区域进行观察，并与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比，在待测多光子成像切片上标注对应区域，得到标注成像区域；

(c)多光子胶原成像：对步骤(b)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行自体荧光和二次谐波成像，得到多光子胶原成像图。

进一步的，所述方法还任选的包括步骤(d)成像分析：将步骤(c)得到的多光子成像图片导入图像分析系统，提取图像的形态学特征与纹理特征，进行胶原层面分析。

进一步的，所述步骤(a)中组织切片的厚度为3～8μm。

进一步的，所述步骤(a)中冷藏保存为-86℃冰箱保存。

进一步的，所述步骤(c)自体荧光和二次谐波成像为利用双通道探测器进行成像。

更进一步的，所述步骤(c)双通道探测器的输出功率为2.0W～2.5W。