[发明专利]早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法

权利要求书

1.一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(a)样本准备：在早期胃癌标本的病变癌旁处连续切取3张厚度为3～8μm组织切片进行常规蜡块制备，取1张进行苏木精-伊红染色，另1张进行病理学Masson染色，剩余1张放置于-86℃冰箱进行冷藏保存，作为待测多光子成像切片；

(b)标注成像区域：在普通光学显微镜下对苏木精-伊红染色切片和Masson染色切片中符合早期胃癌癌旁胶原的区域进行观察，并与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比，在待测多光子成像切片上标注对应区域，得到标注成像区域；

(c)多光子胶原成像：对步骤(b)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行自体荧光和二次谐波成像，得到多光子胶原成像图；

所述自体荧光和二次谐波成像为利用双通道探测器进行成像，双通道探测器的输出功率为2.0W～2.5W，成像激发波长为800～820nm，自体荧光信号通道的接收波长为430～708nm，二次谐波信号通道的接收波长为387nm～409nm，所述成像倍数为20倍，成像面积为400μm×400μm；

(d)成像分析：将步骤(c)得到的多光子成像图片导入图像分析系统，提取图像的形态学特征与纹理特征，进行胶原层面分析；

所述多光子成像图片的形态学特征包括：平均胶原纤维数量、胶原纤维数量标准差、平均胶原纤维交联指数、胶原纤维交联指数标准差、平均胶原纤维长度、胶原纤维长度标准差、平均胶原纤维宽度、胶原纤维宽度标准差、平均胶原垂直度、胶原垂直度标准差、平均胶原交联密度、胶原交联密度标准差、平均胶原弯曲度以及胶原弯曲度标准差；

所述多光子成像图片的纹理特征包括：由图像生成的灰度共生矩阵元素值的平方和、灰度共生矩阵在空间的相似程度、图像纹理的非均匀程度或复杂程度以及纹理的粗细。