[发明专利]一种用于治疗肺血栓栓塞症的以D-二聚体单克隆抗体为靶向装置的载尿激酶微泡

权利要求书

1.一种用于治疗肺血栓栓塞症的以D-二聚体单克隆抗体为靶向装置的载尿激酶微泡，其特征在于：所述微泡为磷脂质地，微泡负载有溶栓药物，微泡表面附有生物素化D-二聚体单克隆抗体；

所述载尿激酶微泡的制备方法如下：

1）超声微泡的制备：取摩尔比为80-90:8-12:3-5的二硬脂酰基磷脂酰胆碱、1,2-棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-PEG2000，溶解于三氯甲烷中并在涡旋混合器上混匀；用干燥的氮气除去三氯甲烷，于真空烘箱中干燥2 h以上；加入脱气的Tris缓冲溶液，得到2.5-3.5mg/mL的磷脂溶液；将磷脂溶液加热至相变温度，用水浴超声振荡器使溶液分散至透明，分装入的西林瓶中；将瓶中的空气置换成全氟丙烷，用铝塑盖和橡胶塞封口，再用机械振荡器振荡40-50s，制得超声微泡；

2）载药微泡的制备：将所述超声微泡与尿激酶混合，孵育1.5-2.5h，低速离心，洗涤，制得载药微泡；

3）生物素化抗体的制备：将鼠抗人D-二聚体单克隆抗体透析，加入PLTK微孔滤膜管中，再向管中加入的N-羟基琥珀酰亚 胺生物素酯，孵育后离心，加入PBS，混匀后再次离心，去除外管滤液，制得生物素化D-二聚体单克隆抗体；

4）载药微泡与抗体的链接：将载药微泡加入到过量的链亲和素中，低温振荡孵育25-35min后，反复低温、低速离心洗涤；加入步骤3）制备的生物素化D-二聚体单克隆抗体，再经25-35 min低温孵育，反复低温、低速离心洗涤，制得成品。

2.如权利要求1所述的一种用于治疗肺血栓栓塞症的以D-二聚体单克隆抗体为靶向装置的载尿激酶微泡，其特征在于，所述溶栓药物为尿激酶。

3.如权利要求1所述的一种用于治疗肺血栓栓塞症的以D-二聚体单克隆抗体为靶向装置的载尿激酶微泡，其特征在于，所述微泡的粒径为1.2-2.2微米。

4.如权利要求1所述的一种用于治疗肺血栓栓塞症的以D-二聚体单克隆抗体为靶向装置的载尿激酶微泡 ，其特征在于，步骤1）中，所述Tris缓冲溶液中含有体积分数为8-12％的甘油和体积分数为8-12％丙二醇。

5.如权利要求1所述的一种用于治疗肺血栓栓塞症的以D-二聚体单克隆抗体为靶向装置的载尿激酶微泡，其特征在于，步骤1）中，所述磷脂溶液的相变温度为55-60℃。

6.如权利要求1所述的一种用于治疗肺血栓栓塞症的以D-二聚体单克隆抗体为靶向装置的载尿激酶微泡，其特征在于，步骤2）中，所述尿激酶与超声微泡的用量比为10000-100000U/mL；低速离心的速率为280-320xg，离心时间为2-4min，洗涤次数为2-4次。

7.如权利要求1所述的一种用于治疗肺血栓栓塞症的以D-二聚体单克隆抗体为靶向装置的载尿激酶微泡，其特征在于，步骤2）中制得载药微泡后，在400倍的光镜下观察载药微泡的大小、形态及分布，以分布均匀、分散性好及未见明显聚集的微泡为合格；若制得微泡大小相差巨大，分布不均，有明显聚集，则重复步骤1）和步骤2）直至符合要求。

8.如权利要求1所述的一种用于治疗肺血栓栓塞症的以D-二聚体单克隆抗体为靶向装置的载尿激酶微泡，其特征在于，步骤3）中，透析后的鼠抗人D-二聚体单克隆抗体与N-羟基琥珀酰亚 胺生物素酯的体积用量比为1:1，添加的N-羟基琥珀酰亚 胺生物素酯的浓度为1mg/mL，孵育时间为3-5h。