[发明专利]一种同时检测多种遗传代谢疾病相关物质的方法和试剂盒

说明书

本申请公开了一种同时检测多种遗传代谢疾病相关物质的方法和试剂盒。本申请方法包括(1)直接在混合内标准品中加有机溶剂或加有机溶剂和琥珀酰丙酮处理液，制成提取工作液；(2)用提取工作液孵育待测血斑样本；(3)离心，取上清液，用串联质谱检测；混合内标准品包括氨基酸、肉碱和17α羟孕酮的同位素内标准品；琥珀酰丙酮处理液中含琥珀酰丙酮内标准品和水合肼。本申请方法，一次采血就可实现四大类物质同时检测，一次性检13种氨基酸、32种肉碱、1种激素和1种酮类，能筛查46种遗传性代谢疾病，提升了新生儿筛查效率。本申请试剂盒将所有同位素内标准品加在一起使用，避免内标准品单独加入的误差和失误，保障了检测结果准确性。

技术领域

本申请涉及遗传代谢疾病相关物质检测领域，特别是涉及一种同时检测多种遗传代谢疾病相关物质的方法和试剂盒。

背景技术

先天性代谢异常(inborn error of metabolism)又称为遗传代谢病(inheritedmetabolic disorders)是一类由于基因突变所导致的可对新生儿内脏、神经、肌肉、骨骼和皮肤等全身多系统组织和器官产生严重危害的代谢性疾病。在我国，每年患有出生缺陷的新生儿大约有80-120万，其中遗传代谢性疾病患儿约占50％。多年实践证明，对新生儿遗传代谢性疾病的早期筛查和早期干预能够对有效防止儿童智力低下，提高人口出生质量，且具有良好的社会和经济效益。

现有应用的新生儿代谢性疾病筛查技术有细菌抑制法、放射免疫法、荧光法等传统的遗传代谢病筛查技术，这些方法一次只能筛查一种疾病。串联质谱(MS/MS)具有超高灵敏性、高特异性、高选择性和快速检验，可以在1-2分钟内对同一个样本的多种代谢物进行同时检测，可以对氨基酸代谢障碍性疾病，脂肪酸代谢障碍性疾病，有机酸代谢障碍性疾病，激素代谢障碍性疾病等多种类型的遗传代谢病疾病进行筛查。并且，由于质谱是直接对代谢物进行检测，能够大大降低筛查假阳性和假阴性的发生率。

国际上已经有美国PerkinElmer公司开发的“非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒(串联质谱法)”；国内有广州丰华生物工程有限公司开发的“非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒(串联质谱法)”，及浙江大学开发的“氨基酸与肉毒碱串联质谱法检测试剂盒”。

无论是国际还是国内的测定试剂盒，都存在如下不足：

A、只能一次性检测部分氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮，而激素类的检测指标需要单独采样，单独检测；

B、新生儿筛查衍生化路线需使用酰氯，会对环境造成污染；

C、在检测氨基酸和肉碱相关的疾病、先天性肾上腺皮质增生症的时候，需要待检者两次采血，多一次采血对待测者容易造成身心影响；

D、在试验过程中，通常都是先将内标准品制成内标准品储备液，然后再由内标准品储备液配制提取工作液，在内标准品比较多的情况下，这两个步骤十分耗费实验人员的时间和精力；而且在分析物进行相对定量时，由于各个内标准品都是单独加入提取工作液中的，而每次操作都不可避免的存在操作误差，从而影响分析物浓度的准确性和检测的可重复性；并且，在众多内标准品单独加入提取工作液的过程中，还可能会出现操作失误，例如误加或少加某个或某几个内标准品，从而导致错误的检测结果。

发明内容

本申请的目的是提供一种改进的同时检测多种遗传代谢疾病相关物质的方法和试剂盒。

为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：

本申请的一方面公开了一种同时检测多种遗传代谢疾病相关物质的方法，其中，多种遗传代谢疾病相关物质包括氨基酸、肉碱、酮类、激素；该方法包括以下步骤，

(1)提取工作液的制备：直接在混合内标准品中加入有机溶剂，或者加入有机溶剂和琥珀酰丙酮处理液，混合均匀，制成提取工作液；