[发明专利]一种明胶微球的制备方法与应用

说明书

本发明提供一种明胶微球的制备方法与应用，步骤为：(1)在搅拌条件下将预热的明胶溶液滴加到预热的含有span80的液体石蜡中，制备稳定的油包水液滴；(2)使用冰浴降温，使液滴形成固化的微球；(3)加入京尼平溶液进行交联；(4)加入异丙醇破乳，使用异丙醇及纯净水离心洗涤，并冷冻干燥，最后获得干燥的明胶微球。该明胶微球球形度高、分散性好、细胞毒性小，并具有网状结构，可吸附并缓释生长因子，可用于体内注射治疗。

技术领域

本发明涉及再生医学领域，特别涉及一种缓释生长因子明胶微球的制备方法。

背景技术

明胶微球是一种注射型载体，由于明胶分子带有电荷，可以通过静电作用吸附生长因子，因此明胶微球可以携带生长因子注射到体内受损部位，并原位缓释生长因子，具有广泛的应用前景。未交联的明胶微球强度低，体内降解过快，交联微球强度好，降解时间长，可满足长时间体内原位生长因子释放的需要。戊二醛是被广泛使用的交联剂，戊二醛交联的明胶微球制备时间短、球形度高、分散性好，但是戊二醛具有细胞毒性，尽管可以用甘氨酸等来中和未参加反应的戊二醛，但是残余的戊二醛可以渗透出来，对细胞活性造成很大影响。为了改善戊二醛细胞毒性高的问题，京尼平被用来做为新型交联剂应用于明胶微球制备。京尼平是一种植物天然提取物，是一种生物交联剂，比戊二醛毒性低1000倍，有效降低了明胶微球的细胞毒性。但是京尼平交联过程比戊二醛缓慢，通常需要12-72h，而戊二醛只需要1-2h，在京尼平交联过程中即使短暂发生相互接触的明胶微球也会由于微球表面没有交联完全而相互黏连，这导致京尼平交联的微球比戊二醛交联微球的球形度低、分散性差。目前常规的京尼平交联微球的制备方法是未交联微球冻干后浸泡在京尼平溶液中进行交联，然而未交联明胶微球在冷冻干燥期间很容易发生黏连，并且在静态条件下交联反应加剧了微球之间的黏连，这导致交联后产生了很多黏连的微球。尽管有研究者在搅拌形成油包水液滴时加入京尼平溶液进行交联，但是在搅拌条件下液滴相互碰撞，京尼平较慢的交联速度仍然产生了较多黏连的微球。

为了改善目前京尼平交联明胶微球制备方法造成微球黏连的缺陷，本发明公开了一种改进的京尼平交联明胶微球的制备方法，即先在搅拌条件下制备稳定的油包水明胶液滴，之后添加了冰浴，利用明胶溶液在低温下形成凝胶的特性，使其形成明胶凝胶微球，之后再在搅拌速率不变的条件下加入京尼平溶液，从而大大减低了交联过程中微球之间的黏连，之后通过破乳、清洗及冻干步骤获得干燥的京尼平交联微球。本发明方法做制备的明胶微球球形度高、分散性好、细胞毒性小，并具有网状结构，可吸附并缓释生长因子，可用于体内注射治疗，具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明公开了一种缓释生长因子明胶微球的制备方法。

本发明的缓释生长因子明胶微球的制备方法通过以下具体技术方案予以实现：(1)在搅拌条件下将预热的明胶溶液滴加到预热的含有span80的液体石蜡中，制备稳定的油包水液滴；(2)使用冰浴降温，使液滴形成固化的微球；(3)加入京尼平溶液进行交联；(4)加入异丙醇破乳，使用异丙醇及纯净水离心洗涤，并冷冻干燥，最后获得干燥的明胶微球。

所述明胶包括碱性明胶及酸性明胶；

所述明胶的胶冻强度为大于100Bloom g，优选120～200Bloom g；

所述明胶溶液的浓度为10-25％(w/v，g/ml)；

所述预热的明胶溶液是指明胶溶液在50-60℃水浴中加热超过1h，优选加热时间为1.5～2.5h；

所述液体石蜡的密度比重为0.89-0.90；

所述预热的液体石蜡是指液体石蜡在50-60℃水浴中加热超过1h，优选加热时间为1.5～2.5h；

所述液体石蜡与span80的体积比为30:1-50:1；

所述搅拌条件为700-1200rpm；