[发明专利]一种cTnI检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种cTnI检测试剂盒，包括校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；所述预处理液中含有咪唑，所述酶结合物工作液中含有酶标记的cTnI抗体，所述磁珠结合物工作液中含有cTnI抗体标记的磁珠。上述的cTnI检测试剂盒能够实现对全血样本中cTnI的准确测定，简化了检测步骤，提高了检测效率。试剂盒最低检测限为0.02ng/ml，线性范围为0.02‑50ng/ml，检测灵敏度高，线性范围宽，检测结果准确。本发明还公开了一种上述的cTnI检测试剂盒的使用方法，其使用步骤简单，有效缩短了cTnI的检测时间，有利于实现cTnI的快速、灵敏检测。

技术领域

本发明属于免疫化学检测技术领域，具体涉及一种cTnI检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

心血管疾病是危害我国人民健康和生命的重大致死性疾病，根据卫生部统计，在我国城市中，每十万人中就有二百三十五人死于心脑血管疾病，占各类疾病引起的死亡的首位，且每年以2％的速度递增。急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)则是造成心血管病人死亡的主要原因。AMI是临床上一种突发性疾病，其发病时常伴有胸痛、恶心、发热、心律失常，血清标志物升高等一系列症状，如能及早确诊并介入治疗，对挽救濒死心肌、改善预后、降低急性期病死率等具有重要意义。

肌钙蛋白(Tn)是心肌与骨骼肌的收缩调节蛋白，cTn是心肌肌钙蛋白，由cTnI、cTnT和cTnC三个亚单位组成。cTnI、cTnC和cTnT在肌肉舒张和收缩过程中起重要调节作用，但cTnC无心肌特异性，一般不用于心肌损伤检测。正常状态下cTnI和cTnT均不能穿透细胞膜进入血液，所以健康人血中cTnI和cTnT极低；如心肌细胞受损，cTnI和cTnT进人细胞间质和血液。但是血液中cTnT的含量在肾衰竭、肺炎和败血症等疾病中，也会发生大幅度的提升，因此以cTnT检测AMI的特异性较低。cTnI在AMI发病后3～5小时升高，15～24小时达高峰，持续时间久，5～10天后可降至正常。目前，以cTnI诊断心肌梗死和心肌细胞损伤，是诊断AMI新的“金标准”。

NT-proBNP测定的方法有电泳法、离子交换柱层析法、ELISA法和放射免疫法等。常规应用电泳法和ELISA法较多，但电泳法无法应用于全自动生化分析仪，所用仪器价格昂贵，所以无法普及；ELISA法操作过程复杂、检测时间过长，不利于实现cTnI的临床快速检测。

中国专利文献CN104330575A公开了一种肌钙蛋白I检测试剂，利用胶体金匀相颗粒特性，将特定的cTnI抗体标记于胶体金颗粒表面，当检测系统或检测环境中存在cTnI时，胶体金颗粒表面的抗体即将与之对应的抗原捕获，并形成抗原-抗体复合物，进而造成局部胶体金颗粒的聚合或堆积，使胶体金匀相试剂透光光谱由红色向蓝色光谱移动，这种移动主要反应为540nm处吸光度的降低和660nm处吸光度的升高，从而达到定量检测人体内cTnI抗原的目的。上述的cTnI检测试剂在一定程度上提到了cTnI的检测速度和灵敏度，但检测试剂仅能用于检测血清或血浆中cTnI含量，无法实现对全血中cTnI含量的准确、快速测定。在实际的临床应用中，需要将采集到的全血样本进行离心分离，使cTnI的检测步骤繁琐、检测成本增高；另一方面，胶体金检测法存在检测重复性差、不利于质控，易出现误读误判等现象。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的cTnI检测无法实现对全血样本检测的缺陷。

为此，本发明提供了一种cTnI检测试剂盒，包括：校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；所述预处理液中含有咪唑，所述酶结合物工作液中含有酶标记的cTnI抗体，所述磁珠结合物工作液中含有cTnI抗体标记的磁珠。

上述的cTnI检测试剂盒，所述酶标记的cTnI抗体为碱性磷酸酶标记的cTnI抗体。

上述的cTnI检测试剂盒，所述碱性磷酸酶标记的cTnI抗体通过以下方法制备：