[发明专利]一种有效提高嗜酸性氧化亚铁硫杆菌硫氧化能力的方法

权利要求书

1.一种有效提高嗜酸性氧化亚铁硫杆菌硫氧化能力的方法，其特征在于，以如下方式实现：

(1)构建重组菌A.ferrooxidans(pJRD215-taq-afeI)，实现增加酰基高丝氨酸内酯合成酶基因(afeI)的拷贝数，通过过表达afeI基因增加酰基高丝氨酸内酯(AHL)的含量，达到提高A.ferrooxidans的硫氧化能力；

其中，构建重组菌A.ferrooxidans(pJRD215-taq-afeI)的方法是：利用分子克隆技术，将taq启动子与afeI片段融合获得大小为716bp的taq-afeI，并与表达质粒pJRD215连接构建形成重组质粒载体pJRD215-taq-afeI，然后转化大肠杆菌SM10，并以含有重组质粒的大肠杆菌SM10为供体菌，以野生型A.ferrooxidans为受体菌，通过接合转移的方式将重组质粒转移进入A.ferrooxidans，获得afeI基因拷贝数增多的重组菌A.ferrooxidans(pJRD215-taq-afeI)；

上述重组菌构建所用引物为：

Taq sen：TTTCCCAAGCTTGAATTCCGGCTCTAGACGACATCATAACGGTTCTGG

Taq ant：GAATTTGTTTCCTGTGTGAAATTG

AfeI sen：TTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAAATTCATGCAGGTTATAACCGGG

AfeI ant：ATTTCTAGCTAGCCGGGATCCTTAGTCCAGATCTATCCA；

或(2)在野生型A.ferrooxidans培养过程中，添加外源的酰基高丝氨酸内酯(AHL)，通过增加AHL含量达到提高A.ferrooxidans的硫氧化能力；

其中，所述外源的酰基高丝氨酸内酯添加时期为A.ferrooxidans培养初期，其添加量为5.4×10^-3～10×10^-3mg/mL。

2.如权利要求1所述有效提高嗜酸性氧化亚铁硫杆菌硫氧化能力的方法，其特征在于：所述野生型A.ferrooxidans选A.ferrooxidans ATCC No.23270。

3.如权利要求1所述有效提高嗜酸性氧化亚铁硫杆菌硫氧化能力的方法，其特征在于：所述接合转移过程中，供体菌与受体菌均需震荡培养至对数中期，其中震荡培养转速不高于180rpm/min，为确保供受体菌性菌毛不受损坏，菌体离心收集时转速不高于8000rpm/min，供体菌与受体菌接合比例为体积比1:2。

4.如权利要求1所述有效提高嗜酸性氧化亚铁硫杆菌硫氧化能力的方法，其特征在于，所述高丝氨酸内酯由重组菌A.ferrooxidans(pJRD215-taq-afeI)培养方式制得，其方法是：以常规方式将重组菌A.ferrooxidans培养至对数后期，利用离心，去除培养物中的菌泥及硫粉颗粒，上清液用等体积的二氯甲烷进行萃取制备AHL，再将二氯甲烷萃取液蒸干后溶于甲醇，获得的溶液即为酰基高丝氨酸内酯的粗提液。