[发明专利]骨髓内皮祖细胞的分离培养基和分离方法有效
| 申请号： | 201711143448.9 | 申请日： | 2017-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN107674858B | 公开（公告）日： | 2021-02-05 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;葛啸虎;王一飞;张梦晨;王小燕 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 温可睿;赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市开发区广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 骨髓 内皮 细胞 分离 培养基 方法 | ||
1.一种培养基，其特征在于，由基础培养基、人血清、bFGF、VEGF、IGF、EGF、氢化可的松、谷氨酰胺和双抗组成；
所述基础培养基为M199培养基；
所述人血清的体积分数为20％；
所述bFGF的浓度为10ng/mL；
所述VEGF的浓度为20ng/mL；
所述IGF的浓度为20ng/mL；
所述EGF的浓度为10ng/mL；
所述氢化可的松的浓度为100ng/mL；
所述谷氨酰胺的浓度为3mmol/L；
所述双抗包括青霉素和链霉素，在培养基中的稀释倍数为1×。
2.权利要求1所述的培养基在分离人骨髓内皮祖细胞中的应用。
3.一种人骨髓内皮祖细胞的分离方法，其特征在于，包括：
步骤1：将人骨髓与等体积高糖DMEM基础培养基混合后，与Ficoll液混合，经离心获得单个核细胞；
步骤2：所述单个核细胞经洗涤后，以权利要求1所述的培养基重悬，接种于包被人纤维连接蛋白的培养容器，培养1天后，取培养液离心，获得细胞沉淀；
步骤3：所述细胞沉淀以权利要求1所述的培养基重悬，接种于新的包被人纤维连接蛋白的培养容器，每2～3天补充培养基一次，培养一周后所得贴壁细胞为内皮祖细胞。
4.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，所述洗涤采用含体积分数为0.2％的人血清的生理盐水。
5.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，所述接种的密度为1×105cell/cm2～2×106cell/cm2。
6.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，
步骤1所述离心的转速为700g，时间为30min；
步骤2所述离心的转速为500g，时间为10min。
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