[发明专利]一种采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法

说明书

技术领域

本发明属于荧光光谱技术领域，具体涉及一种荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法。

背景技术

茄子是茄科植物结的果实，它是一种草本植物。原产自热带，后引入中国。人们种植茄子的历史可追溯到2000多年前。在我国各地种植茄子的现象非常普遍，它是人们最喜爱的常见食物之一，不仅能预防和治疗多种疾病，而且其自身具有很高的药用价值，是一种便宜实惠的蔬菜。茄子内含有丰富的蛋白质、维生素P、维生素C、微量元素、糖类及生物碱等，茄子属于寒凉性质的食物，夏天使用作用较好，具有祛风通络、消肿止痛的功效，适用于肠风入血、清热解暑等症状。茄子中含有丰富的黄酮类化合物，主要的类黄酮成分是芸香和皂苷，在每百克茄子中就含有700毫克的类黄酮，具有强大的抗氧化功能，常使用茄子，可防止细胞癌变，可以使血液中的胆固醇水平降低，从而预防血管动脉硬化。它也能够增强人体细胞的粘着力和毛细血管的弹性，降低毛细血管的脆性和渗透性，防止血管出血，帮助改善血管的微循环，使血小板保持正常功能，从而具有活血、通脉的功能，因此对延缓人体衰老和保健具有必不可少的作用。

牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin)，简称BSA。它是牛血清中的一种球蛋白，主要组成有蛋白质、多肽、激素以及其它成分。它不仅具有廉价易得的优点，而且还有与人血清白蛋白相似的特点，具有重要的运载和存储功能，可以与许多小分子物质发生相互作用，其分子量约为66000。其是有580个氨基酸残基组成的单链蛋白质，其中包括能够发出内源性荧光的色氨酸残基、络氨酸残基、苯丙氨酸残基等。各种药物进入人体后首先与牛血清白蛋白结合，经过血浆的存储和运输，到达受体部位产生药理作用。通过研究药物分子与血清白蛋白之间的相互作用，有助于在分子水平上理解药物在体内的运输和代谢过程，因此对于说明药物的作用机制以及生物大分子与药物小分子相互作用的化学本质都具有重要的意义。

目前，人们对于各类天然产物与牛血清白蛋白的相互作用已经有了较多的研究，对于猝灭方式、结合位点、相互作用力等有了更为深入的讨论，但人们对于用不同溶剂提取茄子不同部位的黄酮类化合物，从而探讨不同部位提取物和相同部位不同溶剂提取物与BSA相互作用的荧光光谱的变化情况的研究比较少，因此更好地了解化学、生命科学、药物学、医学以及一些边沿性、前沿性学科的研究和进展，对保持人体的健康也具有重要的作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法。

基于上述目的，本发明采取了如下技术方案：

采用荧光光谱法研究茄子提取物与牛血清白蛋白相互作用的方法，包括以下步骤：

1)配置0.1mol/L pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液；

2)配置1×10^-5mol·L^-1BSA溶液；

3)制备茄子提取物：新鲜的茄子清洗干净，晾干表面水分，用洁净的剪刀将茄子的梗、皮和肉分离切碎，在分析天平上分别称取30g茄子梗、茄子皮、茄子肉，分别加入约90mL无水乙醇、甲醇进行水浴回流，回流提取时间为2h，提取温度为85℃，分别得到茄子梗乙醇提取液、茄子皮乙醇提取液、茄子肉乙醇提取液、茄子梗甲醇提取液、茄子皮甲醇提取液、茄子肉甲醇提取液，分别把提取液移至100mL容量瓶中，并分别用乙醇、甲醇定容至刻度；

4)利用荧光光谱法研究茄子提取物与BSA的相互作用：在编号为1-6的比色管中均移取4mL BSA溶液于10mL比色管中，再用移液枪依次加入0-4mL茄子提取物，最后用Tris缓冲溶液定容至10mL；混合均匀后放置5min，激发波长设为280nm，激发狭缝和发射狭缝均设为5nm，发射波长扫描范围设为282-500nm，测其荧光发射光谱。

配置0.1mol/L pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液的具体步骤为：准确称取3.0285g三(羟甲基)氨基甲烷固体Tris于250mL容量瓶中，用水溶解并定容于250mL，配制成0.1mol/L Tris溶液；用量筒量取4.2mL浓盐酸，定容于250mL容量瓶中，配制成0.1mol/L HCl溶液；将250mL的0.1mol/L Tris溶液与一定量的0.1mol/L HCl溶液混合后，利用pH计，调节其pH值为7.4。