[发明专利]lncRNA‑NEAT1作为分子病理诊断标志物在制备胶质瘤诊断试剂中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测胶质瘤的分子病理诊断标志物，特别涉及lncRNA-NEAT1作为分子病理诊断标志物在制备胶质瘤诊断试剂中的用途，还涉及一种胶质瘤诊断试剂盒，本发明属于医药技术领域。

背景技术

肿瘤的分类为肿瘤的临床治疗以及科研提供了重要的方向，目前医学界普遍采用的胶质瘤分类诊断准则(2007年世界卫生组织标准)在很大程度上基于形态学指标。该分型系统不但未能揭示肿瘤发生发展的生物学本质，且主观性强，不一致性高达40％。

分子病理学是利用分子和遗传学方法对肿瘤进行诊断和分类，设计和验证对治疗反应和病情发展的预测性生物标记物，不同的基因构成造成的对肿瘤的个人易感性，还有环境因素和生活方式对肿瘤发生的影响，受主观影响较小，客观性强。科研人员通过对胶质瘤发生发展的核心信号通路的共表达基因谱将胶质瘤分成了EGFR module型和PDGFR module型，他们之间具有显著不同的遗传学背景和预后。而目前尚缺乏胶质瘤组织中的分子标志物来详尽的阐述其在胶质瘤分子病理学诊断的作用。

因此，寻找和发现新的胶质瘤中新的分子标志分子弥补EGFR在分子病理学诊断的不足以提高胶质瘤的诊断水平，是胶质瘤防治研究的重要内容。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种新的胶质瘤分子病理诊断标志物；

本发明的目的之二是建立一种胶质瘤诊断试剂盒及其诊断方法，以克服传统的检测胶质瘤相关的lncRNA的原位杂交技术具有价格昂贵，实验周期较长以及灵敏度较差的缺点以满足大规模的实验以及临床应用的需要。

为了达到上述目的，本发明所采用了以下技术手段：

本发明发明人利用胶质瘤公开数据库筛选与EGFR module和PDGFR module型胶质瘤相关的lncRNA并在临床样本中进行了进一步验证，结果发现lncRNA-NEAT1在EGFR module型胶质瘤组织中高表达。

在上述研究的基础上，本发明提出了lncRNA-NEAT1作为分子病理诊断标志物在制备胶质瘤诊断试剂中的用途。

其中，优选的，所述的试剂用于区分EGFR module型胶质瘤以及PDGFR module型胶质瘤。

进一步的，本发明还提出了一种胶质瘤诊断试剂盒，所述的试剂盒含有用于扩增lncRNA-NEAT1的引物对，所述的引物对由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

其中，优选的，所述的试剂盒还包括反转录PCR反应液、SYBR Premix Ex TaqTM荧光染料PCR反应液、MgCl₂、dNTP、RNasin、随机引物、反转录酶以及无RNA酶水。

使用本发明所述的试剂盒用于EGFR module型胶质瘤诊断时，按照以下步骤进行：

(1)提取待测样本的总RNA

(2)反转录

对步骤(1)提取得到的总RNA进行反转录得到cDNA模板；

(3)荧光定量PCR检测

以步骤(2)得到的cDNA为模板，使用所述的引物对进行荧光定量PCR扩增，荧光定量PCR体系为：

荧光定量PCR条件为：95℃30s；95℃5s，60℃15s，共进行44个循环，72℃30s，4℃保存；

(4)结果判定

截断值＝1.52。

其中，优选的，所述样本为胶质瘤新鲜病理组织。

相较于现有技术，本发明的有益效果在于：

1、本发明提供了一种新的胶质瘤分子病理诊断标志物，该标志物可用于区分EGFR module型胶质瘤以及PDGFR module型胶质瘤，从而为胶质瘤的治疗提供依据和方向。

2、本发明提供了一种胶质瘤的诊断试剂盒，并建立了一种诊断胶质瘤的方法，该方法通过PCR方法进行，相较于传统方法，具有成本低、时间段、灵敏度高等优点，能够满足大规模的实验以及临床应用的需要。

附图说明

图1为6个lncRNA在胶质瘤组织中的表达检测；

图2为利用原位杂交检测NEAT1在PDGFR module与EGFR module病人胶质瘤组织中lncRNA-NEAT1的表达水平；

图3为在CGGA，GSE16011，Rembrandt和TCGA数据库中NEAT1在EGFR module中的受试者工作特征曲线(ROC)；