[发明专利]一种肌红蛋白检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种肌红蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括：

（1）校准品；

（2）试剂R1；

（3）酶结合物工作液R2；

（4）磁珠结合物工作液M；

（5）清洗液；

（6）化学发光底物；

所述试剂R1包括：25~100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、150mmol/L NaCl、1~5%蔗糖、1~5%甘油、0.1%牛血清白蛋白、0.4~2mmol/L咪唑、0.05~0.2%吐温20和0.05~0.2%Proclin300，pH为7.0~7.5，所述清洗液含有十二烷基硫酸钠成分，所述试剂盒直接使用手指末梢全血或抗凝静脉全血作为待检样品；

所述校准品是在校准品稀释液中加入肌红蛋白配制而成，所述校准品稀释液包括：20~50mmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸、150~300mmol/L NaCl、1%牛血清白蛋白、0.5~5mmol/LProclin300，pH为6.5~7.5；

所述酶结合物工作液R2的浓度为0.5~2μg/mL，由酶结合物溶液加入酶结合物稀释液配制而成，其中，所述稀释液包括：20~50mmol/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸、150~300mmol/L NaCl、1%牛血清白蛋白、5%蔗糖、5%甘油、0.1%吐温20、0.05~5mmol/LZnCl₂、0.05~5mmol/L MgCl₂、0.05~0.2%Proclin300，pH为6.0~6.5；

所述磁珠结合物工作液M的浓度为0.1~0.5mg/mL，由磁珠结合物溶液加入磁珠稀释液配制而成，其中，所述稀释液包括：20~50mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、150~300mmol/LNaCl、1%牛血清白蛋白、1%蔗糖、1%明胶、0.1%吐温20、1%聚乙烯吡咯烷酮、0.5~5%Proclin300，pH为7.0~8.0；

所述酶结合物的主要成分是碱性磷酸酶标记的肌红蛋白标记抗体；

所述磁珠结合物的主要成分是肌红蛋白包被抗体偶联的羧基磁珠，所述羧基磁珠的粒径为1.3~4μm。

2.根据权利要求1所述的肌红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的肌红蛋白标记抗体是通过将活化的肌红蛋白标记抗体与活化的碱性磷酸酶按摩尔比为1：（1~2）混合，于2~8℃环境下在pH为7.3的三乙醇胺缓冲液中反应18~24h得到。

3.根据权利要求2所述的肌红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述活化的肌红蛋白标记抗体是通过将Traut’s溶液与肌红蛋白标记抗体溶液按摩尔比为1：（15~30）混合，于室温条件下在pH为8.5的三乙醇胺缓冲液中反应12~18min得到；所述活化的碱性磷酸酶是通过将4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液与碱性磷酸酶溶液按摩尔比为1：（10~15）混合，于室温条件下在N,N-二甲基甲酰胺溶液中反应12~18min得到。

4.根据权利要求3所述的肌红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述Traut’s溶液的浓度为1.3~1.5 mg/mL；所述肌红蛋白标记抗体溶液的浓度为2~5 mg/mL；所述4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液的浓度为16~18mg/mL；所述碱性磷酸酶溶液的浓度为16~20mg/mL。

5.根据权利要求4所述的肌红蛋白检测试剂盒，其特征在于，还包括：在所述活化的肌红蛋白标记抗体中加入甘氨酸溶液，所述甘氨酸的物质的量是Traut’s试剂物质的量的10~20倍，充分混匀后于室温下反应8~12min。

6.根据权利要求5所述的肌红蛋白检测试剂盒，其特征在于，还包括：在所述活化的碱性磷酸酶中加入甘氨酸溶液，所述甘氨酸的物质的量是4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐物质的量的10~20倍，充分混匀后于室温下反应8~12min。