[发明专利]一种观察植物细胞膜上蛋白同源二聚体分布情况的方法

权利要求书

1.一种观察植物细胞膜上蛋白同源二聚体分布情况的方法，包括如下步骤：

(a)将目的蛋白的编码基因分别克隆到成对的BiFC表达载体中，得到两个重组表达载体；所述目的蛋白为能够在植物细胞膜上形成同源二聚体的任何蛋白；

(b)将所述两个重组表达载体导入到受体植物的叶片中；

(c)利用TIRFM显微镜对所述受体植物的叶片进行观察。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，所述成对的BiFC表达载体为成对的BiFC植物双元表达载体。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(b)中，所述“将所述两个重组表达载体导入受体植物的叶片”是按照包括如下步骤的方法进行的：

(b1)将所述两个重组表达载体分别转化至农杆菌感受态细胞中，得到两种重组农杆菌；

(b2)向所述两种重组农杆菌中分别加入农杆菌侵染缓冲液，调节OD₆₀₀为0.1～0.3，得到两种侵染菌液；

(b3)将所述两种侵染菌液等体积混合，用无针头注射器吸取后抵住所述受体植物叶片背面进行注射，从而实现将所述两种重组表达载体导入所述受体植物的叶片。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：在步骤(b1)中，所述两个重组表达载体是通过热激法或者电击法转化至所述农杆菌感受态细胞中的；和/或

在步骤(b1)中，将所述两个重组表达载体分别转化至所述农杆菌感受态细胞中后还包括应用PCR技术筛选阳性克隆农杆菌，并培养至农杆菌生长对数期后收集农杆菌的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述农杆菌感受态细胞为GV3101、LBA44044、EHA105或AGL1；和/或

进行所述培养时所用的农杆菌培养液为LB培养液。

6.根据权利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：在步骤(b2)中，所述农杆菌侵染缓冲液的溶剂为水，溶质及浓度为：5g/L D-葡萄糖，50mM MES，2mM Na₃PO₄·12H₂O，pH 5.4。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：在步骤(b)中，将所述两个重组表达载体导入所述受体植物的叶片后，还包括对所述受体植物培养24-36小时的步骤。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：步骤(c)中，所述“利用TIRFM显微镜对所述受体植物的叶片进行观察”是按照包括如下步骤的方法进行的：用剪刀在注射器浸染孔处剪取0.5-1cm²的所述受体植物的叶片，制片，样片放置于TIRFM显微镜上，并调节至激发光呈全内反射条件，之后进行观察。

9.根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：所述受体植物为双子叶植物或单子叶植物。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述双子叶植物为烟草或拟南芥。