[发明专利]水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及稳定同位素检测技术领域，特别涉及水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法。

背景技术

长期以来，由于缺乏一个整体技术，氮在水陆生态系统各种流动途径和在食物网中的贡献无法被定量研究。近年来稳定氮同位素应用方面的研究发展迅速，已成为一种有效的示踪手段，在动植物生理生态学和环境科学领域发挥着不可替代的作用。

在生态系统试验中添加重稳定同位素(例如¹³C或¹⁵N)，能够追踪生源元素的来源、去向，过程并分析其对食物网和生态系统的贡献。通过同位素标记技术获得的信息往往是常规技术不能提供的，有时是全新的。这就扩充了人类对生态系统结构、能量流动、物质循环和对人类干扰响应的认识。为保护和恢复受损害的生态系统提供新的依据。

随着我国经济的高速发展和人民生活水平的不断提高，水产养殖业迅速发展，为人民提供大量低脂高蛋白食品。但由于我国水产养殖行业尚没有精细化设定，在放苗、投饵等一系列生产过程中有很大的浪费，并且使得养殖水体富营养化问题严重。在治理水体富营养化的过程中还要兼顾水产品质量，所以只能利用生物治理措施，而利用微藻稳定养殖水体是最好的选择之一，其中氮元素是治理的关键因素之一。因此，对水产养殖过程中常见微藻的氮元素吸收速率的监测能够有效的评估养殖水体的健康状况。因此，有必要开发一种更加快速、准确的水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的养殖水体富营养化治理时氮元素测定耗时长，人力物力消耗大的问题，提供一种水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法。

本发明的技术方案概述如下：

水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法，包括如下步骤：

(1)测定一水生经济动物从放苗到收获区间，池塘中无机氮盐NaNO₃、NaNO₂和NH₄Cl的浓度变化范围；

(2)根据步骤(1)获得的最小N浓度和最大N浓度，设计七个N浓度梯度；

(3)以不含氮的湛水107-13培养液为基础培养液，按照步骤(2)的设计，分别以NaNO₃、NaNO₂和NH₄Cl为氮源，配置七个N浓度梯度的培养液，再向各个含NaNO₃培养液中加入¹⁵N-NaNO₃，使¹⁵N添加量为含NaNO₃培养液中N质量的10％，向各个含NaNO₂培养液中加入¹⁵N-NaNO₂，使¹⁵N添加量为含NaNO₂培养液中N质量的10％，向各个含NH₄Cl培养液中加入¹⁵N-NH₄Cl，使¹⁵N添加量为含NH₄Cl培养液中N质量的10％，设置三个平行，再分别加入相同浓度的实验藻；

(4)在光照培养箱中培养步骤(3)获得的样品，培养体积为50mL，培养温度为28℃，光照强度为39μmol.m^-2.s^-1，培养时间为4h；

(5)用干燥恒重的玻璃纤维滤膜GF/C，分别抽滤步骤(4)获得的藻液，加入10mL去离子水冲洗，取出附有微藻的玻璃纤维滤膜GF/C，对折，60℃烘干、恒重、研磨后用锡纸包裹、冷冻保存，干燥恒重的玻璃纤维滤膜GF/C的重量为重量1；烘干恒重的附有微藻的玻璃纤维滤膜GF/C的重量为重量2，重量2与重量1之差即为所得微藻重量，采用EA-IRMS系统测定δ¹⁵N和微藻中N元素的重量百分含量；

(6)由以下公式计算出微藻对无机氮的吸收速率：

式①中：V为吸收速率，其单位为：ug·g^-1·h^-1；

¹⁵Ns为培养后藻类样品的¹⁵N丰度；

¹⁵Nn为藻样¹⁵N的天然丰度，为0.00365；