[发明专利]水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法

权利要求书

1.水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法，其特征是包括如下步骤：

(1)测定一水生经济动物从放苗到收获区间，池塘中无机氮盐NaNO₃、NaNO₂和NH₄Cl的浓度变化范围；

(2)根据步骤(1)获得的最小N浓度和最大N浓度，设计七个N浓度梯度；

(3)以不含氮的湛水107-13培养液为基础培养液，按照步骤(2)的设计，分别以NaNO₃、NaNO₂和NH₄Cl为氮源，配置七个N浓度梯度的培养液，再向各个含NaNO₃培养液中加入¹⁵N-NaNO₃，使¹⁵N添加量为含NaNO₃培养液中N质量的10％，向各个含NaNO₂培养液中加入¹⁵N-NaNO₂，使¹⁵N添加量为含NaNO₂培养液中N质量的10％，向各个含NH₄Cl培养液中加入¹⁵N-NH₄Cl，使¹⁵N添加量为含NH₄Cl培养液中N质量的10％，设置三个平行，再分别加入相同浓度的实验藻；

(4)在光照培养箱中培养步骤(3)获得的样品，培养体积为50mL，培养温度为28℃，光照强度为39μmol.m^-2.s^-1，培养时间为4h；

(5)用干燥恒重的玻璃纤维滤膜GF/C，分别抽滤步骤(4)获得的藻液，加入10mL去离子水冲洗，取出附有微藻的玻璃纤维滤膜GF/C，对折，60℃烘干、恒重、研磨后用锡纸包裹、冷冻保存，干燥恒重的玻璃纤维滤膜GF/C的重量为重量1；烘干恒重的附有微藻的玻璃纤维滤膜GF/C的重量为重量2，重量2与重量1之差即为所得微藻重量，采用EA-IRMS系统测定δ¹⁵N和微藻中N元素的重量百分含量；

(6)由以下公式计算出微藻对无机氮的吸收速率：

式①中：V为吸收速率，其单位为：ug·g^-1·h^-1；

¹⁵Ns为培养后藻类样品的¹⁵N丰度，；

¹⁵Nn为藻样¹⁵N的天然丰度，为0.00365；

¹⁵Nenr为加入示踪剂后培养介质初始的¹⁵N丰度，为0.98；

T为培养时间，其单位为h；

PON为微藻所含的总氮，其单位为ug·g^-1。