[发明专利]一种无血清的诱导多功能干细胞冻存液及冻存方法在审

申请号：	201711126234.0	申请日：	2017-11-13
公开（公告）号：	CN108552156A	公开（公告）日：	2018-09-21
发明（设计）人：	刘樱;彭特;陈勇;蔡亚雄;于云飞;乔志平	申请（专利权）人：	广东艾时代生物科技有限责任公司
主分类号：	A01N1/02	分类号：	A01N1/02
代理公司：	广州粤高专利商标代理有限公司 44102	代理人：	陈卫
地址：	528300 广东省佛山市顺***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	冻存液冻存多功能干细胞诱导基础培养基羟乙基淀粉动物血清细胞活力重大意义无血清增殖细胞污染应用研究
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【权利要求书】：

1.一种无血清的诱导多功能干细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液由A液和B液组成。

2.根据权利要求1所述的无血清的诱导多功能干细胞冻存液，其特征在于，所述A液100mL中含有0-3％β-巯基乙醇、0-5％白血病抑制因子、0-4％的NEAA、0-4％的L-谷氨酰胺、0-5μM CHIR99021、0-5μM PD0325901、38-55％的KSR和40-58％的DMEM；所述B液100mL中含有6-12％KSR、0-3.5％的NEAA、0-3.5％的L-谷氨酰胺、0.5-1.5％β-巯基乙醇、1-2％白血病抑制因子、2-5μM CHIR99021、0.1-1μM PD0325901、7-15％的DMSO、6-15％的羟乙基淀粉和55-68％的DMEM。

3.根据权利要求1或2所述的无血清的诱导多功能干细胞冻存液，其特征在于，所述A液100mL中含有0.5-2％β-巯基乙醇、0.5-2％白血病抑制因子、0.3-3％的NEAA、0.3-3％的L-谷氨酰胺、1-4μM CHIR99021、1-4μM PD0325901、40-50％的KSR和45-55％的DMEM；所述B液100mL中含有8-11％KSR、1-3％的NEAA、1-3％的L-谷氨酰胺、0.8-1.2％β-巯基乙醇、1.5-1.8％白血病抑制因子、2.5-3μM CHIR99021、0.5-0.8μM PD0325901、8-13％的DMSO、8-13％的羟乙基淀粉和60-65％的DMEM。

4.根据权利要求3所述的无血清的诱导多功能干细胞冻存液，其特征在于，所述A液100mL中含有0.8％β-巯基乙醇、0.8％白血病抑制因子、1％的NEAA、1％的L-谷氨酰胺、2μMCHIR99021、1μM PD0325901、45％的KSR和51.4％的DMEM；所述B液100mL中含有10％KSR、2％的NEAA、2％的L-谷氨酰胺、1％β-巯基乙醇、1.6％白血病抑制因子、3μM CHIR99021、0.6μMPD0325901、10％的DMSO、10％的羟乙基淀粉和63.4％的DMEM。

5.根据权利要求3所述的无血清的诱导多功能干细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液中A液与B液的体积比为1：1。

6.一种诱导多功能干细胞冻存方法，该方法包括以下步骤：

a.将消化后的诱导多功能干细胞离心后加入所述的冻存液A液，得到诱导多功能干细胞悬液；

b.加入等量的冻存液B液混匀，得到诱导多功能干细胞与冻存液的混合液；

c.将所述的混合液冷冻，再将冷冻后的混合液于液氮中保存。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，其中所述的混合液中诱导多功能干细胞的浓度为1×10⁶-6×10⁶个/mL。

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