[发明专利]钩藤的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤指一种钩藤的培育方法。

背景技术

钩藤是常用的中药材之一，始载于梁代陶弘景的《名医别录》，药用历史悠久。钩藤性味甘、凉，具有清热平肝，息风定惊之功效，其主要化学成分为钩藤碱和异钩藤碱。临床上广泛用于头痛、高血压、惊痫抽搐、神经衰弱等症。钩藤为钩藤片、正天丸、天麻钩藤颗粒、脉君安等多个著名中药品种的主要原料药和中药配方的常用药。不良作息习惯导致高血压、高血脂和高血糖人群数量不断增加，人们对天然植物药的需求日益增加。据不完全统计，仅钩藤每年的需求量即高达10000多吨，其中出口到日本、韩国等国家达4000 多吨。钩藤生长时对于生长地的含水量以及环境湿度有较高的要求，含水量过剩或环境湿度太大会导致其根部或茎部腐坏，甚至死亡。而旋转喷淋的方式覆盖范围小，不适合给钩藤类的灌木浇水；滴罐则需要在地面上铺设复杂多路管道，占用钩藤的生长地，且难以维持钩藤生长需要的湿度；采用传统的从地面用水管灌入的浇水方式，耗水量大、浇水量不均匀、耗时长，易导致部分钩藤因吸水过多而至根部腐坏，此种情况通常会施加防治根腐病的药剂，得到的钩藤并非纯天然、绿色环保的钩藤，为钩藤入药增加风险。事实上，现有的通过分株、扦插、种子等方式并结合传统浇水方式进行栽培获得的钩藤的产量及药用成分偏低，已无法满足递增的需求量。

因此，提供一种纯天然、产量高、药用成分含量高的钩藤的培育方法十分必要。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种钩藤的培育方法，其通过生物技术手段和化学方法，对钩藤进行多倍体诱导，建立钩藤多倍体诱导体系，诱导率高，并结合特有的浇水方式培育的钩藤植株，其药用成分含量增加，产量多。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种钩藤的培育方法，包括以下步骤：

步骤一、将钩藤种子依次经浸泡、消毒后转移至种子培养基中培养20～25d，得到无菌幼苗胚轴；

步骤二、从无菌幼苗胚轴上切取长度为0.4～0.8cm的不含子叶节的胚轴外植体，将胚轴外植体平放在第一愈伤组织培养基中进行暗培养，20～25d后，胚轴外植体的两端膨大即形成胚轴愈伤组织，然后将胚轴愈伤组织转移至第二愈伤组织培养基中进行暗培养 7～20d，得到新鲜愈伤组织；

步骤三、将新鲜愈伤组织转移到分化培养基中进行分化培养20～25d，得到丛芽；

步骤四、将丛芽转接到壮苗培养基中进行壮苗培养，当单株幼苗长度为3～4cm时，在茎基部切断，转移到生根培养基中进行生根培养，20～25d后，长出长1.5～2.0cm的根，得到钩藤幼苗。

优选的是，所述种子培养基为不含激素的MS培养基；

所述第一愈伤组织培养基包括MS、1.0～1.5mg/L的TDZ、0.03～0.05mg/L的NAA；

所述第二愈伤组织培养基包括MS、1.0～1.5mg/L的TDZ、0.03～0.05mg/L的NAA、 80～200mg/L的秋水仙素；

所述分化培养基包括MS、0.1～0.4％的活性炭；

所述壮苗培养基包括MS、1.0～1.5mg/L的6-BA、0.1～0.2mg/L的NAA；

所述生根培养基包括1/2MS、0.5～0.8mg/L的IBA、0.2～0.5mg/L的NAA、0.2％的活性炭。

优选的是，步骤一中浸泡的具体方法为：将选择好的钩藤种子装在小布袋中，置于转速为200rpm的摇床上浸泡4h；消毒的具体方法为：将浸泡好的钩藤种子置于超净工作台上，用10％的次氯酸钠消毒8～10min，然后用无菌水清洗4～6次。

优选的是，步骤四中所述分化培养基还包括2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA。

优选的是，各个步骤的培养温度均为20～25℃。

优选的是，还包括：步骤五、将钩藤幼苗移栽至苗棚内培育，具体为：

a、对苗棚内的土地进行烘烤，然后深翻土地直至土壤细柔、无粘块，撒入牲畜粪便，并加入腐殖质土，调节pH为6.5～8.0，然后铺设厚度为5cm的砂质土，并按照宽度为2m的规格设置两排畦，两排畦之间设有宽为20cm的排水沟；