[发明专利]钩藤的培育方法

权利要求书

1.一种钩藤的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将钩藤种子依次经浸泡、消毒后转移至种子培养基中培养20～25d，得到无菌幼苗胚轴；

步骤二、从无菌幼苗胚轴上切取长度为0.4～0.8cm的不含子叶节的胚轴外植体，将胚轴外植体平放在第一愈伤组织培养基中进行暗培养，20～25d后，胚轴外植体的两端膨大即形成胚轴愈伤组织，然后将胚轴愈伤组织转移至第二愈伤组织培养基中进行暗培养7～20d，得到新鲜愈伤组织；

步骤三、将新鲜愈伤组织转移到分化培养基中进行分化培养20～25d，得到丛芽；

步骤四、将丛芽转接到壮苗培养基中进行壮苗培养，当单株幼苗长度为3～4cm时，在茎基部切断，转移到生根培养基中进行生根培养，20～25d后，长出长1.5～2.0cm的根，得到钩藤幼苗。

2.如权利要求1所述的钩藤的培育方法，其特征在于，

所述种子培养基为不含激素的MS培养基；

所述第一愈伤组织培养基包括MS、1.0～1.5mg/L的TDZ、0.03～0.05mg/L的NAA；

所述第二愈伤组织培养基包括MS、1.0～1.5mg/L的TDZ、0.03～0.05mg/L的NAA、80～200mg/L的秋水仙素；

所述分化培养基包括MS、0.1～0.4％的活性炭；

所述壮苗培养基包括MS、1.0～1.5mg/L的6-BA、0.1～0.2mg/L的NAA；

所述生根培养基包括1/2MS、0.5～0.8mg/L的IBA、0.2～0.5mg/L的NAA、0.2％的活性炭。

3.如权利要求2所述的钩藤的培育方法，其特征在于，步骤一中浸泡的具体方法为：将选择好的钩藤种子装在小布袋中，置于转速为200rpm的摇床上浸泡4h；消毒的具体方法为：将浸泡好的钩藤种子置于超净工作台上，用10％的次氯酸钠消毒8～10min，然后用无菌水清洗4～6次。

4.如权利要求3所述的钩藤的培育方法，其特征在于，步骤四中所述分化培养基还包括2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA。

5.如权利要求1所述的钩藤的培育方法，其特征在于，各个步骤的培养温度均为20～25℃。

6.如权利要求1所述的钩藤的培育方法，其特征在于，还包括：

步骤五、取步骤四得到的钩藤幼苗的叶片，通过流式细胞仪进行多倍体检测，筛选并保留是多倍体的钩藤幼苗，即钩藤多倍体幼苗，利用步骤四的壮苗培养基和生根培养基对钩藤多倍体幼苗进行扩繁；

步骤六、将扩繁后的钩藤多倍体幼苗移栽至苗棚内培育，具体为：

a、对苗棚内的土地进行烘烤，然后深翻土地直至土壤细柔、无粘块，撒入牲畜粪便，并加入腐殖质土，调节pH为6.5～8.0，然后铺设厚度为5cm的砂质土，并按照宽度为2m的规格设置两排畦，两排畦之间设有宽为20cm的排水沟；

b、控制苗棚内温度为23℃，按照每株钩藤幼苗占用20×20cm的土地面积进行移栽，移栽完成后，淋浇定根水，所述定根水包括7～10重量份的维生素C、4～6重量份的油菜素内酯、3～6重量份的吲哚乙酸、2～7重量份的赤霉素、5～9重量份的亚硒酸钠、4～7重量份的钼酸钠、3～5份复合氨基酸、0.4～0.9份的大蒜硒多糖、6～11重量份的蛋醋液、100重量份的水混合而成；

c、之后，每隔4天浇水一次，每隔2天通风一次，控制苗棚内相对湿度为80％～85％。

7.如权利要求6所述的钩藤的培育方法，其特征在于，步骤b与步骤c中，淋浇定根水及浇水时均使用浇水系统，所述浇水系统设置在所述苗棚内，所述浇水系统包括两根输水管、N个滑道以及2N个浇水组件，所述两根输水管水平平行横置在所述苗棚内的上方，且均垂直于畦的宽度方向，每根输水管上沿管长方向等间距设有N个出水孔，所述N个滑道等间距水平平行架设在所述两根输水管之间，每个滑道均与所述两根输水管垂直，一个滑道的两个端部均对应所述两根输水管各自的一个出水孔，一个滑道上设置两个浇水组件，所述浇水组件包括与滑道滑动连接的一个滑块、与滑块固定连接一个电动伸缩杆以及一根浇水管，浇水管的一端与滑道的其中一个端部对应的出水孔密封连通、另一端为与电动伸缩杆的自由端连接的具有长条形喷淋端的喷头；

浇水时，一个滑道内的两个滑块分别带动各自的浇水管滑动至其中一排畦的两侧，电动伸缩杆伸长使喷头靠近钩藤植株，喷头与苗棚内地面的距离为15～20cm，任意两个相邻滑道之间的间距等于所述喷头的长条形喷淋端的长度。