[发明专利]一种苦木组培快繁的技术

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养类，特别涉及一种苦木组培快繁的技术。

背景技术

苦木又名：猗木胆、赶狗木、苦檀。形态特征是落叶小乔木，高达10米。根皮、树皮、枝、叶和果实极苦，故名苦木。嫩枝绿色或紫红色，老枝灰褐色，均有灰白色小点和斑纹。茎和枝折断面淡黄色。叶互生，单数羽状复叶；小叶片卵形或长圆状卵形，先端尖，基部偏斜，边缘有锯齿，两面通常绿色，有时淡红色，叶背沿中脉有柔毛，嫩叶通常红色。5~6月开花，花小，黄绿色，排成聚伞圆锥花序生于叶腋；9~10月果实成熟，果实椭圆形或倒卵形，通常3~4个并生，成熟时红色。它的根、叶、皮均可入药。枝、叶于夏秋季采收为佳，鲜用或晒干备用。根、树皮于春或秋季采剥为佳，鲜用或晒干备用。生长在我国中部、东部、南部都有分布。多生于沟谷或山坡林中，或栽培于村前屋后用山坡上。苦木味苦，性寒，有毒。具有抗菌消炎，祛湿解毒，杀虫的功用。本发明建立苦木的离体再生体系，相对以孢子开始的途径大大缩短了生长周期，为苦木走向商品化生产开辟了途径。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种苦木组培快繁的方法，本发明以苦木细嫩孢子叶为外植体，经过外植体消毒、GGB诱导、增殖、分化、生根等过程建立了苦木离体组培快繁方法，从而实现了本发明的目的。为进一步开发苦木快速生长找到了可靠途径。

本发明一种苦木组培快繁的技术，包括以下的步骤：

（1）外植体消毒：选取健壮苦木的孢子叶新长出的嫩叶，用0.1%高锰酸钾溶液浸泡35min，无菌水冲洗6次后用70%乙醇浸泡25s，用无菌水清洗6次后用0.1%升汞溶液消毒6min，再用无菌水清洗6次后备用；

（2）诱导培养：用解剖刀在经步骤（1）处理后孢子叶表面进行轻微划伤处理并正面朝上接种于诱导培养基中进行GGB诱导，接种后每天光照18小时，光照强度为2600lx，培养温度为24℃的条件下培养直至形成GGB；

（3）增殖培养：将步骤（2）的获得的GGB接种到增殖培养基上进行增殖培养。接种后每天光照18小时，光照强度为2600lx，培养温度为24℃的条件下培养，每两周更换一次培养基;

（4）GGB分化培养：将步骤（1）或（2）获得的GGB转接到分化培养基中进行GGB分化培养，接种后每天光照18小时，光照强度为2600lx，培养温度为29℃的条件下培养，接种后每两周更换一次培养基;

（5）生根培养：当经步骤（4）培养苦木孢子叶伸展，长度约2.6cm时转移至生根培养中进行诱导生根。

步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+4.5mg/L6-BA+5.5mg/L NAA+4.0%蔗糖+0.1%琼脂，pH值为5.9。

步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+4.0mg/LKT+1.5mg/L NAA+3.6%蔗糖+0.6%琼脂，pH值为5.9。

步骤（4）所述的分化培养基为：MS+1.6mg/L6-BA+1.0mg/L IBA+3.6%蔗糖+0.6%琼脂，pH值为5.9。

步骤（5）所述的生根培养基为：MS+1.5mg/L NAA+0.6mg/L IBA+3.6%蔗糖+0.6%琼脂，pH值为5.9。

与现有技术相比本发明的优点是：通过植物组织培养技术在短时间内获得苦木试管苗的方法。以苦木细嫩孢子叶为外植体，经过外植体消毒、GGB诱导、增殖、分化、生根等过程建立了苦木离体组培快繁方法，以达到缩短生长周期，缓解苦木商业化生产种苗缺乏的现状。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

（1）外植体消毒：选取健壮苦木的孢子叶新长出的嫩叶，用0.1%高锰酸钾溶液浸泡12min，无菌水冲洗6次后用75%乙醇浸泡12s，用无菌水清洗5次后用0.1%升汞溶液消毒5min，再用无菌水清洗6次后备用。

（2）诱导培养：用解剖刀在经步骤（1）处理后孢子叶表面进行轻微划伤处理并正面朝上接种于诱导培养基中进行GGB诱导。接种后每天光照16小时，光照强度为1800lx，培养温度为27℃的条件下培养22天后大部分外植体上长出棕褐色的根毛，接着根毛基部膨大长出嫩绿色GGB，待GGB长到一定大小时,幼嫩孢子叶开始白化或黄化,并被新长出的GGB覆盖。所述的诱导培养基为：MS+2.2mg/L6-BA+1.2mg/L NAA+3.7%蔗糖+0.7%琼脂，pH值为5.7。