[发明专利]酪蛋白活性肽的超声辅助模拟消化方法及保健食品应用

权利要求书

1.酪蛋白ACE抑制活性多肽，其特征在于其氨基酸序列为：Leu-Gln-Pro-Pro；

Ala-Pro-Tyr。

2.根据权利要求1所述的酪蛋白ACE抑制活性多肽，其特征在于其氨基酸序列为：Leu-Gln-Pro-Pro。

3.根据权利要求1或2所述的酪蛋白ACE抑制活性多肽的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：

(1)超声预处理酪蛋白酪蛋白：定量称取酪蛋白，溶解在pH＝7.8的磷酸盐缓冲液中，使酪蛋白浓度为1g～5g/100mL，进行超声波处理；超声波处理工艺条件如下：超声处理时间10～30min，间歇比10s/3s，温度25～40℃；超声波处理频率及频率组合为：单频20kHz；

(2)酪蛋白酶解液制备：调节上述蛋白溶液pH7.5～8.0，加入蛋白酶，酶与底物的比例为1:20～50(w/w)，均匀混合，酶解温度50～70℃，酶解时间2～4h；酶解结束后调节混合液pH为7.0，并在沸水浴中灭酶10min，离心获得上清液，脱盐、浓缩、冷冻干燥成粉末；所述的蛋白酶为碱性蛋白酶；

(3)模拟胃肠道消化：配置人工胃液；在37℃下，将将步骤(2)制备得到的酪蛋白水解物与胃液以1:20～50混合，在震荡频率为120～180rpm条件下模拟胃消化2～4h；用NaOH调节pH为6.8，以1:100(w/v)加入胰酶至混合液，继续酶解4～6h；沸水浴灭酶10min，离心取上清液，脱盐、浓缩、冷冻干燥成粉末；

(4)Caco-2模拟小肠上皮细胞吸收：构建Caco-2细胞转运模型，将步骤(3)制备得到的酪蛋白多肽消化产物配置成20mg/ml，加入到Caco-2细胞的绒毛面AP侧(apical，肠腔侧)，0.5～4h后，收集基底面BL侧(basolateral，肠内壁侧)转运的酪蛋白肽，脱盐、冷冻干燥；

(5)采用UPLC-MC鉴定及分析多肽序列：对步骤(4)经过Caco-2细胞吸收的酪蛋白多肽进行鉴定及多肽序列分析，筛选出离子强度强，小于500的多肽序列；

(6)对步骤(5)筛选出来的多肽进行合成以及ACE抑制活性的验证；最终验证得到酪蛋白ACE抑制活性多肽，其氨基酸序列为：

Leu-Gln-Pro-Pro；

Ala-Pro-Tyr；

对步骤(5)鉴定得到的酪蛋白ACE抑制活性多肽进行人工合成，并验证其ACE抑制活性，发现人工合成的多肽具有很强的ACE抑制活性。

4.根据权利要求3所述的酪蛋白ACE抑制活性多肽的制备方法，其特征在于其中步骤(6)中的酪蛋白ACE抑制活性多肽为Leu-Gln-Pro-Pro。

5.权利要求1所述的酪蛋白ACE抑制活性多肽在制备辅助降血压的保健食品中的应用。