[发明专利]一种氯羟吡啶有关物质的高效液相色谱检测方法

说明书

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种氯羟吡啶有关物质的高效液相色谱检测方法；本发明采用的固定相为十八烷基键和硅胶，流动相为pH3.0‑8.0的磷酸盐缓冲液（或醋酸盐或硼酸盐）和甲醇（或乙腈或四氢呋喃）的混合液，柱温为20‑60℃，进样5‑50μL，流速0.5‑2mL/min的条件下注入高效液相色谱仪，选择在波长范围为200‑380nm内进行样品的分析；本发明的检测方法分离效率高、分析速度快、检测灵敏性高，通过检测氯羟吡啶中杂质的含量，控制氯羟吡啶的质量，更好的控制产品的稳定性和质量。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种氯羟吡啶有关物质的高效液相色谱检测方法。

背景技术

氯羟吡啶属羟基吡啶类抗球虫药，在国内是使用最广泛的抗球虫药之一，对各种鸡球虫均有效，通常混在动物饲料中连续用药，国内氯羟吡啶产品主要有氯羟吡啶预混剂。

氯羟吡啶原料药有关物质测定的现有技术仅有中国兽药典标准，如下：

取本品0.10g，置10mL量瓶中，加甲醇约5mL，混匀，加氢氧化钠溶液（1→50）2mL，超声使完全溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取适量，用甲醇定量稀释制成每1mL中约含0.1mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μL，点于硅胶G₂₅₄薄层板[以甲苯-甲醇-三乙胺（3:4:3）预展开，取出后晾干]上，以甲苯-甲醇-三乙胺（3:2:5）为展开剂，展开，晾干。吸取对照溶液5μL，点于同一薄层板上，再以甲苯-甲醇-三乙胺（3:4:3）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于1个，与对照溶液的主斑点比较，不得更深（1.0%）。

然而，现有薄层色谱技术在工艺研究和质量控制上存在显著不足，现有薄层色谱技术专属性差，杂质笼统的显示为斑点，不利于工艺研究的开展，灵敏度差且不能杂质定量，标准限度1.0%证实了薄层色谱技术在有关物质控制上的粗放性和局限性。

综上所述，现有技术在针对氯羟吡啶有关物质检测方面存在显著不足。因此，亟需提供一种全新的氯羟吡啶有关物质检测方法，在保证各相关杂质与有效成分高效分离的基础上，使其具有良好的专属性，精密度和准确度，从而更好地实现对氯羟吡啶的工艺研究和质量控制，为生产工艺优化，扩大经济效益，提供质量更优的产品提供可靠的检测方法。

发明内容

本发明为了克服现有技术中存在的缺陷，提供一种氯羟吡啶有关物质的高效液相色谱检测方法。

本发明提供了一种氯羟吡啶有关物质的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：

（1）样品配制：

取氯羟吡啶样品适量，加碱液与有机相溶解，制成氯羟吡啶样品的储备溶液；流动相稀释，配制成约含氯羟吡啶0.02-0.5mg/mL的供试品溶液。

因氯羟吡啶在有机相与水中均不溶解，只有加少许碱液才能使氯羟吡啶达到有关物质检测所需的浓度，同时碱性不宜太强，以每毫升有机相含10mmol碱量最优。碱液太少样品溶解度不够，碱液过多液相图谱溶剂峰过大及主峰面积不稳定。

当对已知杂质A的检测时，需配置杂质A的检测溶液。

杂质A溶液：取杂质A适量，用流动相溶解，稀释成含杂质A约为0.4-10μg/mL的溶液。

杂质A为2,6-二甲基-4-羟基吡啶或其他杂质，2,6-二甲基-4-羟基吡啶是氯羟吡啶合成过程关键中间体，其结构式如下：

氯羟吡啶与已知杂质A的混合：取杂质A溶液适量与氯羟吡啶溶液适量置量瓶中，流动相稀释，配制成含杂质A一定限度的溶液作为供试品溶液。