[发明专利]一种婴幼儿配方奶粉中乳清蛋白含量的检测方法及实现该方法的试剂盒

说明书

本发明公开了一种婴幼儿配方奶粉中乳清蛋白含量的检测方法及实现该方法的试剂盒，所述方法包括以下步骤：(1)检测样品中总蛋白的含量；(2)检测样品中αs1‑酪蛋白、αs2‑酪蛋白、β‑酪蛋白以及κ‑酪蛋白四种酪蛋白的含量；(3)通过计算总蛋白与四种酪蛋白的含量的差值，该差值即乳清蛋白的含量。本发明通过测定出样品中总蛋白与四种酪蛋白的含量的差值，即可准确的得到乳清蛋白的含量，而且本发明中检测样品中所有的酪蛋白，不涉及到换算系数，检测方法简单方便，检测结果准确可靠，可以准确检测出配方奶粉中乳清蛋白的含量。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种婴幼儿配方奶粉中乳清蛋白含量的检测方法及实现该方法的试剂盒。

背景技术

定量蛋白质组学的目的是对复杂的混合体系中所有的蛋白质进行鉴定，并对蛋白质的量及量的变化进行准确的测定，是当前系统生物科学研究的重要内容。近年来，由于质谱技术和生物信息学的进步，定量蛋白质组学在分析蛋白质组或亚蛋白质组方面已取得了令人瞩目的成就。

在种种成熟的蛋白质定量分析技术中，应用三重四极杆质谱(triplequadrupole)，在选择反应监控模式(selected reaction monitoring，SRM)中，对蛋白质中特异肽进行检测，在完全酶解的情况下，特异肽的摩尔浓度与对应蛋白质的摩尔浓度相同，故可以通过其与蛋白质分子量计算获得蛋白质的浓度。公开号为CN103616454A的专利文献公开了一种定量检测人β-酪蛋白含量的方法以及试剂盒，该方法中利用人β-酪蛋白酶解后所获得的特异多肽序列，设计出同位素标记的特异肽和同位素标记内标物的序列，并基于内标法对人β-酪蛋白进行定量检测。

乳中的蛋白质分为乳清蛋白和酪蛋白两大类，酪蛋白是奶酪中的主要蛋白质，并且因此而得名。在酸性环境中(特别是pH4.6)，酪蛋白会凝结沉淀，而婴幼儿的肠胃功能在尚未发育完全，在食用酪蛋白含量较高的牛奶后，会在胃酸的作用下凝结成块，难以消化和排空，导致婴幼儿出现胃胀、厌食等症状。乳清蛋白是奶酪制作的副产品，其中含有大量的活性蛋白质，例如乳铁蛋白、溶菌酶、免疫球蛋白等，这些蛋白质具有杀菌、抗病毒的活性，能够帮助婴幼儿建立自身免疫系统。

在牛奶中酪蛋白和乳清蛋白的比例约为8:2。在母乳中该比例为4:6。因此，我国《食品安全国家标准-婴儿配方食品》(GB 10765-2010)中规定“乳基婴儿配方食品中乳清蛋白含量应≥60％”。我国的《食品安全国家标准-婴幼儿配方食品和乳粉乳清蛋白的测定》(GB/T 5413.2-1997)中介绍了一种基于十二烷基环酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的检测方法。样品用SDS-PAGE进行分离后，对酪蛋白与乳清蛋白各谱带的光密度进行测定，从而求得酪蛋白与乳清蛋白的含量比率。该方法由于本身性能限制，只适宜作为定性方法和半定量方法，无法用于定量检测，所以没有能够广泛推广使用。

在过去5年间，有部分团队拟采用胰蛋白酶酶解-同位素稀释-液相色谱串联质谱法建立检测方法。《食品安全国家标准-婴幼儿配方食品和乳粉中乳清蛋白的测定(征求意见稿)》(GB 5413.xx-201x)采用了该方法，以VGINYWLAHK和IDALNENK作为特异肽，分别检测样品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的含量，通过一个换算系数折算出乳清蛋白含量。虽然α-乳白蛋白和β-乳球蛋白占总乳清蛋白的75％左右，但是其比例随着生产条件、加工工艺的不同而有较大改变。所以，难以通过α-乳白蛋白和β-乳球蛋白来准确计算乳清蛋白含量。虽然可以通过增加被测乳清蛋白种类的方法来提高计算准确率，但是该方法存在严重的缺陷，由于乳清蛋白中含有数百种乳清蛋白，将会极大增加实验的成本和复杂程度。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种婴幼儿配方奶粉中乳清蛋白含量的检测方法，可以准确检测出配方奶粉中乳清蛋白的含量。

本发明的技术方案为：一种婴幼儿配方奶粉中乳清蛋白含量的检测方法，包括以下步骤：

(1)检测样品中总蛋白的含量；