[发明专利]利用枯草芽孢杆菌制备D‑阿洛酮糖差向异构酶的方法

权利要求书

1.枯草芽孢杆菌制备D-阿洛酮糖差向异构酶的发酵培养基，其特征在于，组分如下，均为质量百分比：

玉米浆粉3～8％，葡萄糖0.8～1.5％，萘乙酸0.08～0.12％，七水硫酸镁0.015～0.025％，磷酸氢二铵0.01～0.02％，硫酸锰0.015～0.02％，硫酸铜0.015～0.018％，氯化铁0.08～0.12％，余量水，pH6.8～7.2。

2.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，组分如下，均为质量百分比：

玉米浆粉5％，葡萄糖1％，萘乙酸0.1％，七水硫酸镁0.02％，磷酸氢二铵0.015％，硫酸锰0.018％，硫酸铜0.016％，氯化铁0.1％，余量水，pH6.8～7.2。

3.利用枯草芽孢杆菌制备D-阿洛酮糖差向异构酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BLCY-005，接种于种子培养基中，进行种子培养，制得种子液；

(2)取步骤(1)制得的种子液，按照体积百分比1～2％的接种量接种于权利要求1所述的发酵培养基中，在温度35～37℃、pH6.8～7.2，罐压0.05Mpa，通风比2.0vvm，转速250～400rpm，溶氧30％～40％的条件下，发酵培养36h，制得发酵液；

(3)取步骤(2)制得的发酵液，经离心分离、洗涤菌体，再经干燥、粉碎，制得D-阿洛酮糖差向异构酶干粉。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BLCY-005来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.13152。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，种子培养基组分如下，均为重量百分比：

蛋白胨0.8～1.2％，玉米浆粉：0.4～0.6％，甘油：0.8～1.2％，余量水，pH6.8～7.0。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，种子培养条件为：温度35～37℃、220rpm震荡培养8h。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，洗涤为采用纯净水进行洗涤。

8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，干燥条件为：温度-40～-45℃、压力-80～-100kpa。

9.权利要求3所述方法制备的D-阿洛酮糖差向异构酶在制备D-阿洛酮糖中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，步骤如下：

(i)配制质量百分比为25～35％的果糖溶液；

(ii)向步骤(i)中配制的果糖溶液中添加上述D-阿洛酮糖差向异构酶干粉，添加量为每公斤果糖原料添加0.5～1.0gD-阿洛酮糖差向异构酶干粉，在60℃反应8～12小时，制得阿洛酮糖粗液；

(iii)将步骤(ii)制得的阿洛酮糖粗液经脱色、离交、浓缩、色谱分离、浓缩后，制得阿洛酮糖。