[发明专利]一种小球藻的保藏方法

权利要求书

1.一种小球藻的保藏方法，其特征在于，包括如下步骤：

将处于对数生长期的、无杂菌的小球藻滴于加了琼脂平板培养基的培养容器中，振荡使其分散，然后放置于温度22～26℃、光照度4000～6000lx的光照培养箱中24h连续光照培养5～10d，再用封口膜密封、倒置、低温弱光照保藏；

其中，所述琼脂平板培养基由如下步骤制备得到：

(1)制备每升含有土壤浸提液30～50mL、NaHCO₃ 0.5～1.0g、KNO₃ 1.0～1.5g、KH₂PO₄0.8～1.0g、琼脂15～20g、余量为水、pH为8.0～8.5的溶液，灭菌后得到A液；

(2)制备每升含有100～160g的山梨糖醇溶液，经过滤除菌，得到B液；

(3)在A液凝固前加入B液，B液的加入体积为A液体积的1/200，得到混合液；

(4)将所述混合液加入到培养容器中，紫外光照射15～20min，凝固后得到琼脂平板培养基。

2.根据权利要求1所述小球藻的保藏方法，其特征在于，所述处于对数生长期的小球藻是将小球藻加入到盛有生长培养基的容器中，在光照度4000～6000lx、24h连续光照、温度22～26℃、150～180rpm条件下振荡培养5～7d得到；

所述生长培养基，每升含有葡萄糖2.0～3.0g、蛋白胨0.8～1.0g、K₂HPO₄·3H₂O 0.4～0.6g、MgSO₄·7H₂O 0.8～0.9g、NaCl 0.4～0.6g、MnCl₂·4H₂O 0.008～0.01g、AlCl₃ 0.008～0.01g、FeSO₄·7H₂O 0.009～0.01g、余量为水，pH为7.0～8.0。

3.根据权利要求1所述小球藻的保藏方法，其特征在于，所述培养容器为96孔培养板，所述的将混合液加入到培养容器中是将150～200μL的混合液加入到96孔培养板中。

4.根据权利要求1所述小球藻的保藏方法，其特征在于，每100mL所述土壤浸提液由如下步骤制备得到：采集地表以下10～20cm深处的土壤10g，加水100mL，煮沸30min，冷却后4000rpm离心20min，取上清液，加水至100mL，得到土壤浸提液。

5.根据权利要求1所述小球藻的保藏方法，其特征在于，步骤(2)中，所述过滤除菌为0.22μm滤膜过滤除菌。