[发明专利]一种通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法

权利要求书

1.一种通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A)选取小孢子发育处于单核早-中期的幼穗，4-7℃低温预处理3-21d；

B)步骤A中预处理后的簇毛麦幼穗用10-15％NaClO处理10-15min，无菌水冲洗后釆取花药置于含甘露醇50-70g/L，添加1.0-1.2g/L CaCl₂、0.9-1.0g/L MES和0-30mg/L秋水仙碱，pH 5.5-6.0的提取液中24-26℃，暗处理2天；换入添加麦芽糖75-105g/L、谷氨酰胺1000-2000mg/L、水解酪蛋白100-600mg/L、10-30mg/L脯氨酸、KT 0.5-1.5mg/L、2,4-D 0.5-2.0mg/L，pH5.5-6.0的N6诱导培养基中培养，诱导愈伤组织形成；

C)步骤B中的愈伤组织转入添加20-40g/L麦芽糖、0.5-1.5mg/L 6-BA、1.0-3.0mg/L KT、0-0.1mg/L NAA、4-6g/L琼脂粉，pH 5.5-6.0的2/3MS分化培养基中培养；待再生芽长至2-4cm时，转入添加蔗糖20-40g/L、谷胱甘肽0-200mg/L、NAA0.05-1.0mg/L、矮壮素0.3-6mg/L、4-6g/L琼脂粉，pH 5.5-6.0的1/2MS壮苗生根培养基中培养，获取根、茎、叶完整的再生植株。

2.根据权利要求1所述的通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法，其特征在于，所述的步骤A中，所述的小孢子发育处于单核早-中期的幼穗一般是指簇毛麦幼穗叶耳距为±2cm时的幼穗。

3.根据权利要求1所述的通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法，其特征在于，所述的步骤A中，幼穗5℃低温处理7-10d。

4.根据权利要求1所述的通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法，其特征在于，所述的步骤B中，提取液中添加20mg/L秋水仙素。

5.根据权利要求1所述的通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法，其特征在于，所述的步骤C中，壮苗生根培养基中添加100mg/L谷胱甘肽、0.6mg/L NAA和0.5mg/L矮壮素。

6.根据权利要求1所述的通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法，其特征在于，所述的步骤C中，壮苗生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，添加蔗糖30g/L、谷胱甘肽100mg/L、NAA 0.6mg/L、矮壮素0.5mg/L和5.5g/L琼脂粉，pH 5.8。

7.根据权利要求1所述的通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A)选取小孢子发育处于单核早-中期的幼穗，5℃低温预处理1周左右；

B)步骤A中预处理后的簇毛麦幼穗用10％NaClO处理10min，无菌水冲洗后釆取花药置于含甘露醇60g/L，添加1.1g/L CaCl₂、0.976g/L MES和20mg/L秋水仙碱，pH 5.8的提取液中24℃，暗处理2天；换入添加麦芽糖90g/L、谷氨酰胺1600mg/L、水解酪蛋白400mg/L、脯氨酸20mg/L、KT 0.5mg/L、2,4-D1.0mg/L，pH5.8的N6诱导培养基中培养，诱导愈伤组织形成；

C)步骤B中的愈伤组织转入添加30g/L麦芽糖、0.5mg/L 6-BA、1.5mg/L KT、0.05mg/L NAA、5.5g/L琼脂粉，pH 5.8的2/3MS分化培养基中培养；待再生芽长至2-4cm时，转入添加蔗糖30g/L、谷胱甘肽100mg/L、NAA 0.6mg/L、矮壮素0.5mg/L、5.5g/L琼脂粉，pH 5.8的1/2MS壮苗生根培养基中培养，获取根、茎、叶完整的再生植株。

8.根据权利要求1所述的通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法，其特征在于，所述的通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法还包括：

D)壮苗至再生苗长约5-10cm，开管炼苗1-2天，最后洗去根系携带的培养基残渣，水培，至再生苗长约12-18cm，根系发达时移栽获得再生植株。