[发明专利]一种蛹虫草发酵转化女贞子中橄榄苦苷生成橄榄苦苷苷元的方法

权利要求书

1.一种蛹虫草发酵转化女贞子中橄榄苦苷生成橄榄苦苷苷元的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，蛹虫草种子液的制备

取蛹虫草菌丝块接种于PDA培养基中，放置在恒温培养箱中，进行蛹虫草菌种活化；

将活化后的蛹虫草菌种接种于种子液培养基中，得到蛹虫草种子液；

S2，蛹虫草种子液的发酵转化

取干燥后的女贞子，将其粉碎后过60目筛，将筛选后的女贞子加入配料制成发酵培养基；

将蛹虫草种子液接种于灭菌后的发酵培养基中，静置培养，经过发酵后将橄榄苦苷转化为橄榄苦苷苷元。

2.根据权利要求1所述的一种蛹虫草发酵转化女贞子中橄榄苦苷生成橄榄苦苷苷元的方法，其特征在于，步骤S1中，活化后的蛹虫草菌种接种在种子液培养基后，在25℃的温度条件下，以130r·min^-1的转速在回旋式振荡器上恒温培养5天，即可得到蛹虫草种子液。

3.根据权利要求1所述的一种蛹虫草发酵转化女贞子中橄榄苦苷生成橄榄苦苷苷元的方法，其特征在于，步骤S1中，恒温培养箱的温度为25℃，培养时间为6天。

4.根据权利要求1所述的一种蛹虫草发酵转化女贞子中橄榄苦苷生成橄榄苦苷苷元的方法，其特征在于，步骤S1中，PDA培养基的组成成分为：马铃薯200g·L^-1，葡萄糖25g·L^-1，琼脂15g·L^-1，PH状态为自然。

5.根据权利要求1所述的一种蛹虫草发酵转化女贞子中橄榄苦苷生成橄榄苦苷苷元的方法，其特征在于，步骤S1中，种子液培养基的组成成分为：葡萄糖25g·L^-1，酵母膏15g·L^-1、KH₂PO₄1g·L^-1、MgSO₄1g·L^-1和VB₁0.05g·L^-1，PH状态为自然。

6.根据权利要求1所述的一种蛹虫草发酵转化女贞子中橄榄苦苷生成橄榄苦苷苷元的方法，其特征在于，步骤S2中发酵培养基的制作方法是：称取粉碎后的女贞子置于三角瓶中，加入水、KH₂PO₄、MgSO₄和VB₁，密封后于121℃下高压蒸汽灭菌30min，作为发酵培养基。

7.根据权利要求6所述的一种蛹虫草发酵转化女贞子中橄榄苦苷生成橄榄苦苷苷元的方法，其特征在于，女贞子、水、KH₂PO₄、MgSO₄和VB₁的用量为女贞子20g、水100g、KH₂PO₄0.5g、MgSO₄0.5g、VB₁0.01g。

8.一种如权利要求1-7任一所述的一种橄榄苦苷及其苷元含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)橄榄苦苷对照品溶液的制备：精密称取橄榄苦苷对照品，加入适量甲醇使其溶解，配制成浓度0.2、0.35、0.4、0.8、1mg·mL^-1的对照品溶液；

(2)橄榄苦苷苷元对照品溶液的制备：精密称取橄榄苦苷苷元对照品，加入适量甲醇使其溶解，配制成浓度0.2、0.35、0.4、0.8、1mg·mL^-1的对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：分别称取干燥后的女贞子粉和发酵后菌质各5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇100mL，75℃水浴回流90min，过滤，蒸干溶剂，加入适量甲醇使其溶解，定容，即得；

(4)将得到的对照品溶液和供试品溶液进行高效液相色谱测定，即可得到发酵前后橄榄苦苷及其苷元的含量。

9.一种如权利要求8所述的一种橄榄苦苷及其苷元含量的检测方法，其特征在于，高效液相色谱测定的条件为：使用C₁₈色谱柱，洗脱系统为乙腈∶水＝20∶80，柱温为25℃，流速为1.0mL·min^-1，进样量为20μL。