[发明专利]一种可检测NF‑κB活化的双荧光素酶报告细胞及其构建方法

权利要求书

1.一种可检测NF-κB活化的双荧光素酶报告细胞，其特征在于，是引入了NF-κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。

2.一种构建可检测NF-κB活化的双荧光素酶报告细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)稳定表达NF-κB FLuc单克隆细胞：HEK293细胞感染表达NF-κB FLuc的慢病毒，感染后用杀稻瘟菌素筛选，获得稳定表达NF-κB FLuc HEK293细胞；上述细胞用有限稀释法进行亚细胞克隆，单个细胞克隆用不同浓度TNF-α刺激，选取具有高水平应答的细胞克隆；再次进行有限稀释法亚细胞克隆，选取对TNF-α刺激具有高水平应答的细胞克隆用于步骤(2)；

(2)稳定表达NF-κB FLuc/TK RLuc的单克隆细胞：步骤(1)筛选的稳定表达NF-κB FLuc单克隆细胞转染质粒pTK Rluc和pBabe hygro；pTK Rluc与pBabe hygro比例为20：1,转染后用潮霉素筛选；所得稳定细胞用有限稀释法进行亚细胞克隆，单个细胞克隆用不同浓度TNF-α刺激，选取对TNF-α刺激具有高水平FLuc应答同时稳定高表达RLuc的细胞克隆。