[发明专利]一种白英倍半萜提取物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种白英倍半萜提取物及其制备 方法和应用。

背景技术

白英，又名白毛藤，为茄科茄属植物白英(Solanum lyratum Thunb)的干燥 全草，具有清热解毒、祛风除湿之功效，为临床常用抗肿瘤药物。有关白英抗 肿瘤药效物质的研究，国内外科技人员一直集中在甾体生物碱、甾体皂苷及黄 酮类化合物，尽管这些化合物表现出一定的抗肿瘤生物活性，但临床效果并不 理想。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抗肿瘤生物活性明显，具有关键抗 肿瘤药效的白英倍半萜提取物。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种白英倍半萜提取物，所述提取物包括分属6个结构类型的32个倍半萜， 其中18个倍半萜为新化合物；

所述6个倍半萜结构类型分别为：

作为优选的技术方案，所述18个新倍半萜化合物分别为：

1)化合物类型之A、B型：

2)化合物类型之C、D、E、F型：

作为优选的技术方案，所述32个倍半萜中已知倍半萜的化学结构为：

本发明还提供一种制备白英倍半萜提取物的方法，包括步骤：

1)提取及有效消除叶绿素

取18～22重量份的白英药材原植物，加入95％乙醇，乙醇液面高出药材平 面2.5～3.5cm，加热回流提取3次，提取液合并、在0.08～0.12MPa，48～52℃ 下减压浓缩以去除脂溶性叶绿素等杂质，然后利用氯仿反复萃取，在33～37℃， 0.05～0.07MPa下氯仿萃取液合并、减压浓缩得浓缩物；

2)有效消除黄酮类化合物

氯仿萃取物通过聚酰胺柱层析进行吸附，首先用13～17体积份的去离子水 洗脱以除去色素等杂质，然后用18～22体积份的45％乙醇洗脱液，而黄酮类化 合物继续吸附在聚酰胺层析柱上，因而有效除去黄酮类化合物；

3)有效祛除甾体生物碱

聚酰胺柱层析的45％乙醇洗脱液，在0.09～0.11MPa，53～57℃下减压浓缩 后，首先用1.3～1.7体积份的乙酸乙酯溶解，然后用3％稀盐酸连续萃取出甾体 生物碱，所述稀盐酸第1～2次用量为1.5体积份，第3～4次用量为1.0体积 份，而倍半萜类化合物则留在乙酸乙酯部位；

4)倍半萜化学部位的有效获得

萃取之后的乙酸乙酯部位，首先利用氨水洗脱，所述氨水PH为10，第1次 用量为1.5体积份，第2～3次用量为1.0体积份，然后将乙酸乙酯部位在0.07～ 0.09MPa，43～47℃下减压浓缩，即得到倍半萜化学部位。

作为优选的技术方案，所述步骤1)中加热回流提取3次具体提取温度是 80℃，第1次提取1小时，第2～3次各为40分钟。

作为优选的技术方案，所述步骤1)中石油醚反复萃取具体是石油醚沸程为 60℃～90℃，第1～2次用量为浓缩液体积的2.0倍，第3～4次用量为浓缩液 体积的1.5倍，第5～6次用量为浓缩液体积的1.0倍。

作为优选的技术方案，所述步骤1)的氯仿反复萃取具体是萃取6次，其中 氯仿第1～2次用量为被萃取物体积的2.0倍，第3～4次用量为被萃取物体积 的1.5倍，第5～6次用量为被萃取物体积的1.0倍。

作为优选的技术方案，所述步骤2)中乙醇洗脱液还含有倍半萜、甾体生物 碱。

本发明将白英倍半萜提取物用于制作抗肿瘤药物。

白英倍半萜的抗肿瘤生物活性研究

(一)、抗肿瘤活性筛选：

1、实验方法：用含5％胎牛血清的RPMI-1640培养基培养淋巴癌P388细胞、 人鼻咽癌HONE-1细胞、口腔上皮癌KB细胞及结肠癌HT29细胞，肿瘤细胞处于 对数生长期后转入24孔培养板，细胞浓度为5000个/ml/孔。培养孔内加入不 同浓度的待测药液，培养72小时；应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法，以 鬼臼乙叉及顺铂为阳性对照，评价倍半萜单体的抑制肿瘤细胞生长活性，用图 解法计算出IC₅₀值。