[发明专利]一种石斛多倍体成苗诱导方法

权利要求书

1.一种石斛多倍体成苗诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)选取抗逆性好、生长快、茎杆粗、纤维含量低、药效成分含量高的霍山石斛品种作为多倍体培育的二倍体霍山石斛；

(2)将二倍体霍山石斛按照常规方法进行栽培管理，在开花后的5～10天内进行同株异花授粉，授粉后的霍山石斛植株，放置通风、半透光条件下，保持湿度30～50％、温度22～28℃，直至蒴果形成；

(3)剪下蒴果，在无菌工作台内用85％酒精消毒3～5min，再使用0.1～0.3wt％的升汞水溶液消毒5～10min，无菌蒸馏水冲洗3～5遍，沿蒴果纵轴切开，将二倍体石斛种植接种在1/2MS液体培养基中，间歇振荡后萌发培养30～50天得到二倍体植株；

(4)将四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体植株幼苗；常规炼苗驯化栽培至开花得到四倍体植株；

(5)将二倍体植株与四倍体植株人工授粉杂交、结果，且互为父本和母本，即得到三倍体霍山石斛种子；

(6)将三倍体霍山石斛种子进行播种，待长出幼苗后，置自然光下炼苗5～10天，然后放置在20～30℃、75～85％的湿度下培养，得到三倍体霍山石斛成苗。

2.根据权利要求1所述的石斛多倍体成苗诱导方法，其特征在于，所述步骤(3)萌发培养的条件为室温25℃，光周期14小时/天，光强度3000Lux。

3.根据权利要求1所述的石斛多倍体成苗诱导方法，其特征在于，所述步骤(4)多倍体愈伤组织的诱导分化是将其移入含有0.01％秋水碱的1/2MS固体培养基中，诱变处理150～180小时。

4.根据权利要求1所述的石斛多倍体成苗诱导方法，其特征在于，所述步骤(5)二倍体植株与四倍体植株在花期人工授粉杂交。