[发明专利]一种表面修饰S‑层蛋白的壳聚糖微球、制备及应用

权利要求书

1.一种表面修饰S-层蛋白的壳聚糖微球，其特征在于，所述壳聚糖微球是以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，以Span-80为乳化剂，环己烷为油相，通过乳化交联法制备的，并通过乳酸菌S-层蛋白修饰。

2.权利要求1所述的表面修饰S-层蛋白的壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

（1）乳酸菌S-层蛋白提取：收集乳酸菌在MRS培养基中生长至对数期的菌体，洗涤后与LiCl/GuHCl溶液先后混合孵育，离心收集上清后得S-层蛋白提取物；

（2）乳酸菌S-层蛋白纯化：对步骤（1）中S-层蛋白粗提物进行分离纯化；

（3）乳酸菌S-层蛋白鉴定：鉴定步骤（2）中纯化后的S-层蛋白；

（4）壳聚糖微球制备：以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，以Span-80为乳化剂，环己烷为油相，通过乳化交联法制备5-氟尿嘧啶壳聚糖微球；

（5）乳酸菌S-层蛋白修饰壳聚糖微球：将步骤（2）中纯化的S-层蛋白和步骤（4）中制备的壳聚糖微球分别溶于磷酸盐缓冲液，两者混合后在一定条件下孵育，离心弃去上清，得S-层蛋白修饰壳聚糖微球。

3.根据权利要求2所述的表面修饰S-层蛋白的壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，所述乳酸菌为携带S-层蛋白的乳酸菌，包括嗜酸乳杆菌、布氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、短乳杆菌、开菲尔乳杆菌、卷曲乳杆菌的一种或多种。

4.根据权利要求2所述的表面修饰S-层蛋白的壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中LiCl/GuHCl溶液的浓度分别为5 mol/mL和4 mol/mL，每1 g湿菌体与10 mL的LiCl溶液37℃孵育30 min，离心取上清后，与一半体积的GuHCl溶液37℃孵育60 min。

5.根据权利要求2所述的表面修饰S-层蛋白的壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，步骤（4）具体是将壳聚糖物质加入醋酸溶液中，配置成壳聚糖溶液，按5-氟尿嘧啶与壳聚糖的质量比称取相应质量的5-氟尿嘧啶投放到上述醋酸溶液中，搅拌使其溶解后，慢慢加入到含有Span-80与环己烷的锥形瓶中，充分搅拌后，维持一段时间，按比例加入戊二醛继续反应，分离产物，洗涤，冷冻干燥后，得到5-氟尿嘧啶壳聚糖微球。

6.根据权利要求4所述的表面修饰S-层蛋白的壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，醋酸浓度0.2 mol/L，水油相比为1:2，交联剂戊二醛用量2 mL，5-氟尿嘧啶与壳聚糖的质量比为1:4，Span-80的用量1 mL。

7.根据权利要求2所述的表面修饰S-层蛋白的壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，步骤（5）中蛋白浓度为340 μg/mL，25℃，50 r/min恒温孵育4 h。

8.权利要求1所述的表面修饰S-层蛋白的壳聚糖微球在功能性食品中的应用。

9.权利要求1所述的表面修饰S-层蛋白的壳聚糖微球在药品中的应用。