[发明专利]一种透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白纳米纤维血管修复材料及其制备方法

说明书

本发明涉及一种透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白纳米纤维血管修复材料及其制备方法，该方法包括，通过还原胺化法得到透明质酸寡糖‑胶原蛋白偶联产物，然后通过静电纺丝方法制备得到该新型透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白静电纺丝纤维膜，通过对内皮细胞在纤维膜材料上的形貌观察、增殖情况分析和表型鉴定，表明该纤维膜材料有较好的生物相容性，有良好的促血管内皮化增殖效果，用透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白有望作为血管修复的支架材料。

技术领域

本发明涉及一种透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白纳米纤维血管修复材料及其制备方法，

属于生物医用材料制备领域。

背景技术

透明质酸(HA)是一种存在于细胞外基质中的糖胺聚糖，在维持组织细胞结构和功能完整性，调控细胞的粘附、增殖和分化等方面发挥重要作用。透明质酸特有的流变学特性、粘弹性、吸湿性、以及良好的生物相容性使其在生物医学领域有广泛应用，特别是低分子量的透明质酸在抗凝血和促进血管化方面，具有很好的利用前景。胶原蛋白是细胞外基质中主要的蛋白质成分，是由三条肽链形成的三螺旋结构的蛋白质，在组织工程和生物医学领域具有广泛应用。

中国专利文献CN103260628A(申请号201180048162.7)公开了一种促进血管生成的药物组合物，其中组合物的活性组分为分子量为12～2000kDa的透明质酸与选自胶原蛋白、明胶、细胞及生长因子中的一种或多种的组合，透明质酸的浓度为0.02～50mg/mL，有效用于促进血管生成。中国专利文献CN105037529A(申请号201510405796.3)公开了一种透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白新型生物材料及其制备方法，该发明指出透明质酸的3～10双糖片段有刺激血管再生的作用，所以该发明通过酶法水解和分离纯化，首先成功制备批量透明质酸3～10双糖片段，然后通过交联制备透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白，其中透明质酸寡糖的分子量为397.33～3911.21Da，在交联产物中，透明质酸寡糖的质量百分比为0.2～5.1％。

利用透明质酸寡糖(oHAs)修饰胶原蛋白，制备一种具有抗凝血和促进血管化功能的新型血管修复支架，有望用于血管移植，修复与再生，治疗严重威胁人类健康的心血管疾病。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白纳米纤维血管修复材料及其制备方法，通过还原胺化法得到透明质酸寡糖-胶原蛋白偶联产物，然后通过静电纺丝方法制备一种新型透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白静电纺丝纤维膜，并对纤维膜材料的生物相容性及促血管内皮化性能进行研究，为制备血管修复支架材料用于血管修复与再生奠定基础。

本发明的技术方案如下：

一种透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白纳米纤维血管修复材料的制备方法，包括如下步骤：

(1)透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白的制备：通过氰基硼氢化钠还原透明质酸寡糖醛基与胶原蛋白上自由氨基缩合形成终产物席夫碱，在30～40℃条件下磁力搅拌20～30h得到反应液，除去反应液中未反应的透明质酸寡糖，得到透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白；

(2)糖基化胶原蛋白的纤维成型：利用静电纺丝工艺，将步骤(1)得到的透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白溶入有机溶剂中，磁力搅拌制备纺丝液，然后在15～25kV的高压电场下，调节纺丝液的给液速度为1.0～2.0mL/h，纺丝液总体积为0.5～1.5mL，静电纺丝制备三维多孔纳米纤维膜材料，并采用质量体积百分比浓度为20～30％的戊二醛水溶液熏蒸交联40～60h；

其中，透明质酸寡糖的分子量范围为776～3000Da，偶联得到透明质酸寡糖修饰的胶原蛋白中透明质酸寡糖的质量百分比为1.44％～2.66％。

根据本发明优选的，步骤(1)中所述的缩合反应的溶剂为体积比3:2的六氟异丙醇和0.1mol/L NaHCO₃溶液的混合体系，共5mL，pH 7.0。