[发明专利]鹿茸极薄片HPLC标准指纹图谱及其构建方法

说明书

本发明公开了鹿茸极薄片HPLC标准指纹图谱及其构建方法，该构建方法，包括供试品溶液和对照品溶液的制备，采用线性梯度洗脱，流动相A为0.144％三氟乙酸水溶液，流动相B为0.1％三氟乙酸乙腈溶液；流速：0.8‑1.0mL/min；检测波长：265‑275nm，以高效液相色谱法进行测定，得鹿茸极薄片标准指纹图谱，该指纹图谱中有20个共有特征峰，其中3号峰为尿嘧啶，13号峰为腺苷，16号峰为酪氨酸。本发明方法及标准指纹图谱能全面、准确评价鹿茸极薄片的整体质量，有利于保证鹿茸极薄片的质量及药效。

技术领域

本发明属于中药分析技术领域，特别是涉及一种测定鹿茸极薄片的高效液相色谱特征指纹图谱的方法。

背景技术

鹿茸为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervus elaphusLinnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，具壮肾阳，益精血，强筋骨，调冲任，托疮毒的功效，是中医治病保健的常用补益药材。

鹿茸极薄片为岭南地区的常用中药饮片，在广东鹿茸饮片市场上占主导地位。该饮片酒润及蒸制包扎的炮制工艺，为岭南地区炮制技术特色，历史较为悠久，已被纳入“岭南中药文化遗产”保护目录，并被收录于《广东省中药饮片炮制规范》“鹿茸片(薄片)”项下。鹿茸极薄片具有厚度为0.06～0.1mm的极薄片的外观性状特征。

鹿茸极薄片的性状和炮制加工方法都与《中国药典》收载的鹿茸片有较大的区别，具有一定炮制特色，但该特色炮制工艺现仍处于较为粗糙的状况，缺乏规范性和生产技术标准。而在质量标准方面，主要以《广东省中药饮片炮制规范》(2011版)第二册中“鹿茸片(薄片)”项下的质量标准为依据的，但该标准的性状鉴定内容不够具体，且缺乏相应的显微鉴别方法和指标成分含量测定，处于较不完善的状态，无法对岭南特色鹿茸极薄片进行完善的质量评价。

在指纹图谱方面，鹿茸已有不少研究。阎正等建立了鹿茸的毛细管电泳指纹图谱，并通过不同产地及种类保健品鹿茸指纹图谱的比较分析得出，多批样品的指纹图谱有2个峰为共有峰，不同产地的鹿茸有显著性差异，表明鹿茸的主要化学成分因产地不同有较大差异。周杰建立了鹿茸11批次样品的蛋白指纹图谱，发现梅花鹿茸比马鹿茸所含的主要成分含量高，鹿茸样品中所含蛋白成分相对稳定，但含量差别较大。武文等建立了鹿茸的柱前衍生化高效液相指纹图谱，为科学地评价及有效控制鹿茸质量提供了有效可靠的方法，该方法采用2， 4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生化试剂对鹿茸药材进行处理，高效液相色谱条件为PhenomenexR Luna 5u C18(2)100R(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱，甲醇-醋酸钠缓冲液梯度洗脱，流速1. 0mL/min，柱温20℃，检测波长360nm。现有的鹿茸特征图谱是以《药典》中的炮制方法作为参考的，而岭南特色炮制的鹿茸极薄片并没有相对应的指纹图谱。

鹿茸中化学成分比较复杂，单一化学成分的含量测定难以评价其质量。目前鹿茸已有柱前衍生化高效液相等色谱指纹图谱的报道，但未见国内外有鹿茸极薄片指纹图谱的报道。

发明内容

本发明在继承的基础上对鹿茸片揭示了其主要成分特点，建立了鹿茸极薄片指纹图谱，并与《中国药典》2015年版一部的炮制的鹿茸片特征图谱进行比较，分析探讨其异同，阐述鹿茸极薄饮片之岭南特色，使鹿茸片质量可控、稳定、安全有效，更全面地反映鹿茸极薄片内在的质量。

本发明的目的在于提供一种鹿茸极薄片的指纹图谱及其构建方法。

本发明所采取的技术方案是：