[发明专利]鹿茸极薄片HPLC标准指纹图谱及其构建方法

权利要求书

1.鹿茸极薄片HPLC标准指纹图谱，其特征在于，该指纹图谱中有20个共有特征峰，分别记为1号峰～20号峰，其相对保留时间依次分别为：0.354min、0.900～0.901min、1.000min、1.140～1.145min、1.487～1.490min、1.649～1.653min、1.770～1.774min、2.065～2.071min、2.210～2.216min、2.584～2.593min、2.736～2.767min、2.921～2.949min、3.048～3.071min、3.253～3.272min、3.438～3.458min、3.632～3.646min、3.704～3.720min、4.075～4.083min、4.956～4.965min、5.045～5.055min。

2.根据权利要求1所述的鹿茸极薄片HPLC标准指纹图谱，其特征在于，3号峰为尿嘧啶，13号峰为腺苷，16号峰为酪氨酸。

3.权利要求1～2任一所述鹿茸极薄片HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)制备鹿茸极薄片供试品溶液；

2)制备对照品溶液：精密称取尿嘧啶、腺苷、酪氨酸，盐酸水溶液溶解，分别制成浓度已知的对照品溶液；

3)鹿茸极薄片的HPLC指纹图谱的建立：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，进样，用高效液相色谱仪测定，线性梯度洗脱程序如下：

0～10min，流动相A：100％→100％，流动相B：0％→0％；

10～25min，流动相A：100％→95％，流动相B：0％→5％；

25～30min，流动相A：95％→90％，流动相B：5％→10％；

30～50min，流动相A：90％→60％，流动相B：10％→40％；

50～55min，流动相A：60％→45％，流动相B：40％→55％；

55～65min，流动相A：45％→20％，流动相B：55％→80％；

65～70min，流动相A：20％→0％，流动相B：80％→100％；

70～75min，流动相A：0％→0％，流动相B：100％→100％；

4)鹿茸极薄片HPLC的标准指纹图谱：测定至少8批鹿茸极薄片样品供试品溶液的指纹图谱，由各指纹图谱中共有特征峰构成的指纹图谱为鹿茸极薄片HPLC的标准指纹图谱。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤1)中制备鹿茸极薄片供试品溶液的具体操作为：取鹿茸极薄片样品粉碎，精密称取，加入0.08～0.12mol/L盐酸，使鹿茸极薄片的浓度为0.3～0.5g/mL，超声提取，放冷补重，离心，取上清，微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于：所述超声提取的频率为230-260W，时间为1-2h。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于：所述离心的转速为2500～3500rpm，离心时间为10～30min。

7.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤2)中，对照品溶液中尿嘧啶的浓度为10-30μg/ml、腺苷的浓度为10-30μg/ml、酪氨酸的浓度为30-90μg/ml。

8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于：步骤2)中，对照品溶液中尿嘧啶的浓度为15μg/ml、腺苷的浓度为20μg/ml、酪氨酸的浓度为48μg/ml。

9.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤3)中，高效液相色谱仪进行测定时的条件为：流动相A为0.144％三氟乙酸水溶液，流动相B为0.1％三氟乙酸乙腈溶液；流速：0.8-1.0mL/min；检测波长：265-275nm；柱温30-35℃；进样量25-30μL。