[发明专利]牛源性成分检测试剂盒

说明书

本发明是检测用品领域内的牛源性成分检测试剂盒，由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为4重PCR引物组合，各对引物为黄牛D‑loop、水牛D‑loop、牦牛D‑loop和内源基因序列16S rRNA，膜芯片为顺序固定在支持膜表面的4组探针序列和一组阳性对照探针序列，分别为黄牛D‑loop探针、水牛D‑loop探针、牦牛D‑loop、16S rRNA探针和Positive探针，引物组合中有非对称PCR扩增引物，为5’端带生物素标志（biotin）的引物。本发明克服了现有技术费时费力成本高的缺陷，提供的牛源性成分检测试剂盒操作简单，快速灵敏，检测通量大，检测结果可视化，成本低廉。

技术领域

本发明涉及检测用品领域，具体为一种牛源性成分检测试剂盒。

背景技术

随着中国城乡居民收入的增加、生活水平的提高，牛肉已经成为我国主要肉类食品之一。2000年至2016年，国内牛肉消费量从510.2万吨增长至759万吨左右，中国也成为了世界第三大牛肉消费国。我国产的牛主要有黄牛、水牛和牦牛等三种，黄牛产于全国各地，主要是平原地区；水牛产于我国南方，主要是江南地区；牦牛产于西北高原地区，主要是青藏高原地区。其中牦牛以其生长于高寒、无任何污染环境，属于独特的半野生半原始动物，营养价值和市场价值也相对较高。近年来，食品及加工产品经常出现掺假现象，尤其是牦牛肉制品中，经常被曝光用猪肉或者黄牛肉冒充，涉嫌虚假宣传欺诈消费者和侵犯消费者的合法权益。所以，建立一套鉴定三种牛源性成分的方法是非常有必要的。

基于核酸的检测方法是目前最普遍、最准确的动物源性成分检测技术，检测方法主要包括PCR(聚合酶链式反应)技术和基于分子杂交的基因芯片技术。目前仍以PCR技术应用最为广泛，其常用的技术方法包括普通定性PCR、巢式PCR、多重PCR、荧光定量PCR等方法。普通定性PCR方法检测效率低，尤其检测多基因对象时更加费时费力；巢式PCR虽然提高了检测的灵敏度，但同样存在检测效率的问题；多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，但常规的电泳检测结果很难判断，容易出现假阳性和假阴性结果；荧光定量PCR方法灵敏度高，但其成本高，并且需要特殊检测仪器。基因芯片也是常用的肉类产品检测技术，目前一般采用玻璃片作为固相支持物，实验过程需要相应的点样仪和芯片识读仪，同样成本较高。因此研发一种快速、方便、灵敏、廉价、可视化和高通量的检测方法将具有非常好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术费时费力成本高的缺陷，提供一种操作简单，快速灵敏，检测通量大，检测结果可视化，成本低廉的牛源性成分检测试剂盒。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的牛源性成分检测试剂盒由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为4重聚合酶链式反应(PCR)引物组合，在与探针互补的一条链的PCR引物的5’端进行生物素修饰，各对引物的碱基序列5’-3’如下：

16S rRNA：正向引物：GACCTCGATGTTGGATCAGGAC

反向引物：GATAGAAACCGACCTGGATTG

黄牛D-loop：正向引物：AACACAGAATTTGCACCCT

反向引物：ATTAAGCTCGTGATCTAATGGT

水牛D-loop：正向引物：CTGACTTTACACTCTAGCCTA

反向引物：GGATTTGACTTGAATGCACT

牦牛D-loop：正向引物：CTAACAACACACATCCCCAA

反向引物：TTAAGCTCGTGATCTAGTGGA