[发明专利]一种珍珠活力成分的鉴定

说明书

本发明公开了一种珍珠活力成分的鉴定，鉴定的具体步骤为：将珍珠水解得水溶性珍珠蛋白，然后将沉淀物酸解得酸溶性珍珠蛋白，离心沉淀物冷冻干燥得角壳蛋白；将角壳蛋白用肽N‑糖苷酶F酶解；采用分离胶对珍珠蛋白进行电泳，电泳后凝胶染色，脱色，扫描图谱并分析；将显色后的蛋白凝胶割下，处理后用胰蛋白酶酶解，用液相色谱分离提取出肽段；将肽段进行质谱检测，获取质谱图，测出分子量和电荷比m/z，然后利用质谱得到的m/z数值进行数据库比对。有益效果为：本发明得到的珍珠总蛋白成分齐全，减少了蛋白质样品水解，能快速、高效、准确地鉴定珍珠活力成份，为珍珠蛋白的进一步深入研究和综合开发提供理论依据。

技术领域

本发明涉及属生化分析技术领域，尤其是涉及一种珍珠活力成分的鉴定。

背景技术

三角帆蚌(HyriopsiscumingiiLea)为我国特有种，隶属于软体动物门(Mollusca)瓣鳃纲(Lamellibranchia)真瓣鳃目(Eulamellibranchia)蚌科(Unionidae)帆蚌属(Hypriosis)，为淡水底栖贝类，在鄱阳湖、洞庭湖、太湖等大中型湖泊及其流域中广泛分布。其所产珍珠质地细腻光滑，色泽鲜艳，晶莹剔透，是我国生产淡水珍珠的当家品种。珍珠颜色有白、黄、紫、红、黑等基本色相，每种色相又包含很多色度，而颜色及其色度均一性是衡量珍珠价值的重要指标之一，为了制作颜色一致、色度均匀的高品质项链，往往需采用化学漂白和人工分拣的处理方式。但是，化学漂白处理会破坏珍珠表面结构，降低光泽度，严重影响珍珠品质，而人工分拣需要大量的年轻劳动力，且分拣结果仍存在颜色误差，所以人工培育色度均一的珍珠具有重要的经济价值。由于珍珠质颜色主要由遗传决定，蛋白质可能是决定珍珠颜色的关键，因此，利用蛋白质组学技术方法，对参与珍珠颜色形成的蛋白成分进行分析和鉴定是必需的。但是珍珠中蛋白含量极低，提取过程中极易酸化，降解，不易提取，珍珠中蛋白存在以糖基化为主的多种蛋白质翻译后修饰情况，一个蛋白在2D电泳时候可能存在多个蛋白质点，增加了分析的难度，此外，珍珠在内的cDNA或protein数据库严重不足，造成蛋白质鉴定特别是质谱分析时难于进行比对。

现有技术如授权公告号为CN 101788541 B的中国发明专利，公开了一种分离富集和鉴定大分子量蛋白质的方法，该方法利用低熔点琼脂糖和聚丙烯酰胺混合凝胶作为电泳支持介质，联和应用凝胶垂直电泳结合高效液相色谱分离-电喷雾质谱鉴定的分析路线和固相梯度pH干胶条等电聚焦结合上述凝胶垂直电泳分离-基质辅助激光解吸电离质谱鉴定的分析路线，分离鉴定大分子量蛋白质。所提供的凝胶孔径大、机械强度大、分辨率高、重现性好、及质谱兼容性好，可同时根据组分的不同比例调整合适的大分子量分离范围。能选择性地分离100kDa以上分子量区间的蛋白质，重现性达RSD7.6％，明显提高鉴定率。本方法为分离大分子量蛋白质提供有效工具，可应于蛋白质组学研究领域。但是该方法是针对蛋白质分子量为100kDa以上的大分子量蛋白质，珍珠总蛋白的分子量分布广泛，该方法不适合鉴定珍珠蛋白成分。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能快速、高效、准确地鉴定珍珠活力成份，珍珠总蛋白成分齐全，除去蛋白中的糖链、降低分析难度，减少了蛋白质样品水解的珍珠活力成分的鉴定。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种珍珠活力成分的鉴定，鉴定的具体步骤为：