[发明专利]一种珍珠活力成分的鉴定

权利要求书

1.一种珍珠活力成分的鉴定，其特征在于：所述鉴定的具体步骤为：

1)将珍珠用次氯酸溶液清理，洗净，晾干，磨粉，过筛，加入去离子水水解，离心，上清液透析得水溶性珍珠蛋白，然后将离心沉淀物中加入冰醋酸溶液酸解，离心，上清液透析得酸溶性珍珠蛋白，离心沉淀物冷冻干燥得角壳蛋白；

2)将角壳蛋白溶于尿素或盐酸胍溶液中，用二硫苏糖醇预处理后再于暗室中用碘乙酰胺处理，透析，酶解，分离，纯化，洗脱，得预处理后角壳蛋白，备用；

3)采用分离胶对珍珠蛋白进行SDS-PAGE电泳，电泳后凝胶染色，然后脱色至背景清晰，最后扫描图谱并分析条带；

4)将显色后的蛋白凝胶割下，清洗干净，晾干，用二硫苏糖醇预处理后再于暗室中用碘乙酰胺处理，取出后放入胰蛋白酶溶液中，低温处理后去除多余酶液，然后加入碳酸氢铵，酶解，再加入甲酸停止反应，最后用液相色谱分离提取出肽段，备用；

5)将肽段进行质谱检测，获取质谱图，测出分子量和电荷比m/z，然后利用质谱得到的m/z数值进行数据库比对；

所述步骤3中分离胶为含有0.01-0.02‰的石墨烯的10-15％的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺混合凝胶；所述石墨烯中还原石墨烯和氧化石墨烯的重量比为1:4.3-4.7，所述氧化石墨烯的羧基率为2-4wt％；

所述步骤4中液相色谱分离填料为改性介孔硅胶，所述改性介孔硅胶中2-巯基-1-甲基咪唑和2-巯基-5-甲基-1,3,4-噻二唑的偶联密度为90-110μmol/g和30-50μmol/g。

2.根据权利要求1所述的一种珍珠活力成分的鉴定，其特征在于：所述步骤1中次氯酸溶液的浓度为0.08-0.12％。

3.根据权利要求1所述的一种珍珠活力成分的鉴定，其特征在于：所述步骤1中水解条件为：在50-70℃高压均质0.2-1h；酸解条件为：冰醋酸溶液浓度为8-12％，在温度为25-30℃、搅拌速率为110-130rpm下酸解10-14h。

4.根据权利要求1所述的一种珍珠活力成分的鉴定，其特征在于：所述步骤2中角壳蛋白酶解用酶为肽N-糖苷酶F，酶解温度为30-40℃，pH为12-18h。

5.根据权利要求1所述的一种珍珠活力成分的鉴定，其特征在于：所述步骤3中用考马斯亮蓝R-250染色2-4h。

6.根据权利要求1所述的一种珍珠活力成分的鉴定，其特征在于：所述步骤4中胰蛋白酶酶解温度为35-40℃，时间为10-15h。