[发明专利]评价抗生素植物毒性的方法

说明书

本发明公开了一种评价抗生素植物毒性的方法，包括以下步骤：将蔬菜种子播种在含有抗生素的半固体培养基中进行培养；根据培养过程中蔬菜种子的发芽情况，获取蔬菜种子的半数种子发芽时间T50、发芽数、发芽数概率分布、胚根长度，以它们作为参数评价抗生素的植物毒性。本发明方法利用蔬菜种子对抗生素的敏感性，通过蔬菜种子的发芽实验评价抗生素的植物毒性，其中以蔬菜种子的半数种子发芽时间T50、发芽数、发芽数概率分布、胚根长度为参数，能够有效地评价不同浓度抗生素的植物毒性，具有试验周期短、操作简单等优点。

技术领域

本发明属于污染物毒性评价技术领域，涉及一种评价抗生素毒性的方法，具体涉及一种利用蔬菜种子发芽实验评价抗生素植物毒性的方法。

背景技术

抗生素通过使用进入环境后，作为一种新兴的污染物引起了人们的广泛关注。尤其在养殖行业，抗生素长期以低剂量添加在饲料中用于动物疾病的预防，且抗生素大部分以原药的形式被动物排出体外，通过多种途径进入到土壤和水体中。因此，抗生素作为一种伪持久性污染物，以低浓度在环境中长期存在。当前，以植物实验进行对抗生素生态毒理的研究，是对微生物和动物实验评价抗生素潜在风险的重要补充。而以往的研究大多集中在对植物光合作用阶段影响的研究方面，缺乏对植物早期生长阶段影响的研究，即对植物种子发芽阶段的研究。与植物光合作用阶段相比，种子发芽阶段作为植物早期生长的关键阶段，具有对污染物敏感及生长周期短等特点。此外，目前国内外缺乏对种子发芽实验评价毒性相关方法和指标的研究以及对污染物敏感种子的研究。

发明内容

本发明需要解决的技术问题的是克服现有技术的不足，提供一种试验周期短、操作简单的评价抗生素植物毒性的方法，该方法能够有效地评价不同浓度抗生素的植物毒性。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种评价抗生素植物毒性的方法，包括以下步骤：

S1、将蔬菜种子播种在含有抗生素的半固体培养基中进行培养；

S2、根据步骤S1培养过程中蔬菜种子的发芽情况，获取蔬菜种子的半数种子发芽时间T50、发芽数、发芽数概率分布、胚根长度；

S3、以步骤S2获得的半数种子发芽时间T50、发芽数、发芽数概率分布、胚根长度为参数评价抗生素的植物毒性。

上述的方法，进一步改进的，步骤S1中，所述含有抗生素的半固体培养基的制备方法包括以下步骤：

(1)配制盐溶液，其中NaCl的浓度≤50mM，NH₄Cl的浓度≤0.4mM，pH为4.7；

(2)将步骤(1)中得到的盐溶液与琼脂混合，加热，使琼脂溶解，得到含有琼脂的盐溶液；

(3)将步骤(2)中得到的含有琼脂的盐溶液与等体积的抗生素溶液混合，冷却凝固，得到含有抗生素的半固体培养基；所述抗生素溶液中抗生素的浓度是所述含有抗生素的半固体培养基中抗生素的浓度的两倍。

上述的方法，进一步改进的，所述含有抗生素的半固体培养基中抗生素的浓度≥0.01μM，NaCl的浓度≤25mM，NH₄Cl的浓度≤0.2mM，pH为5.0；所述含有抗生素的半固体培养基中琼脂的质量体积比为0.6％～0.8％。

上述的方法，进一步改进的，所述抗生素为水溶性抗生素；所述水溶性抗生素为盐酸四环素。

上述的方法，进一步改进的，步骤S1中，所述培养在无光照条件下进行；所述培养的温度为25℃～27℃；所述培养的时间为48h～52h。

上述的方法，进一步改进的，所述培养过程中每隔12h补加1mL～2mL含有抗生素的盐溶液；所述含有抗生素的盐溶液中抗生素的浓度、NaCl的浓度、NH₄Cl的浓度、pH均与所述步骤S1中的含有抗生素的半固体培养基相同。