[发明专利]评价抗生素植物毒性的方法

权利要求书

1.一种评价抗生素植物毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将蔬菜种子播种在含有抗生素的半固体培养基中进行培养；所述含有抗生素的半固体培养基中抗生素的浓度≥0.01 μM，NaCl的浓度为25 mM，NH₄Cl的浓度为0.2 mM，pH为5.0；所述培养在无光照条件下进行；所述培养的温度为25℃～27℃；所述培养的时间为48h～52 h；

所述含有抗生素的半固体培养基的制备方法包括以下步骤：

（1）配制盐溶液，其中NaCl的浓度为50 mM，NH₄Cl的浓度为0.4 mM，pH为4.7；

（2）将步骤（1）中得到的盐溶液与琼脂混合，加热，使琼脂溶解，得到含有琼脂的盐溶液；

（3）将步骤（2）中得到的含有琼脂的盐溶液与等体积的抗生素溶液混合，冷却凝固，得到含有抗生素的半固体培养基；所述抗生素溶液中抗生素的浓度是所述含有抗生素的半固体培养基中抗生素的浓度的两倍；所述含有抗生素的半固体培养基中琼脂的质量体积比为0.6%～0.8%；所述抗生素为水溶性抗生素；所述水溶性抗生素为盐酸四环素；

S2、根据步骤S1培养过程中蔬菜种子的发芽情况，获取蔬菜种子的半数种子发芽时间T50、发芽数、发芽数概率分布和胚根长度；

S3、以步骤S2获得的半数种子发芽时间T50、发芽数、发芽数概率分布和胚根长度为参数评价抗生素的植物毒性。

2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述培养过程中每隔12 h补加1 mL～2mL含有抗生素的盐溶液；所述含有抗生素的盐溶液中抗生素的浓度、NaCl的浓度、NH₄Cl的浓度、pH均与所述步骤S1中的含有抗生素的半固体培养基相同。

3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述蔬菜种子在播种之前还包括以下处理：将蔬菜种子进行过筛处理，选取处于14目标准筛下、16目标准筛上的种子；将经筛选后的蔬菜种子进行消毒、清洗和干燥。

4.根据权利要求3中所述的方法，其特征在于，所述蔬菜种子为十字花科芸薹属蔬菜种子；所述十字花科芸薹属蔬菜种子为大白菜种子；

和/或，所述消毒是将筛选后的蔬菜种子浸泡在体积浓度为75%（v/v）的乙醇中；所述浸泡在搅拌条件下进行；所述浸泡的时间为30 s；

和/或，所述清洗采用的是去离子水；所述清洗的次数为3次～5次；每次所述清洗的时间控制在30 s～40 s。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述蔬菜种子的半数种子发芽时间T50根据培养时间为6 h～8 h、8 h～10.5 h和10.5 h～12 h时种子发芽数线性拟合方程计算得到；

所述蔬菜种子的发芽数为培养24 h时种子发芽的数量；

所述蔬菜种子的发芽数概率分布由二项式计算得到，计算公式如下：

式中，n为实验选用的种子数；k为发芽的种子数；p为实验所用种子发芽概率，为培养24h时100粒种子中发芽种子所占的比例；

所述蔬菜种子的胚根长度根据培养结束后采集的照片并采用ImageJ软件分析得到。

6.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤S3中，以在不含抗生素的半固体培养基中培养的蔬菜种子为对照组，其中所述不含抗生素的半固体培养基中琼脂的质量体积比为0.6%～0.8%，NaCl的浓度为25 mM，NH₄Cl的浓度为0.2 mM，pH为5；通过比较分析蔬菜种子的半数种子发芽时间T50、发芽数和发芽数概率分布、胚根长度，评价抗生素的植物毒性。