[发明专利]HPLC法分离测定伊索克酸及其有关物质的方法

权利要求书

1.HPLC法分离测定伊索克酸及其有关物质的方法，其特征在于，所述方法采用的色谱柱是以辛烷基硅烷键合硅胶为填料，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，进入检测器进行检测；所述有关物质包括A-G的一种或多种，具体结构式如下所示：

所述流动相A为六氟磷酸钾溶液，所述流动相B为有机溶剂，所述有机溶剂为乙腈和/或甲醇；所述梯度洗脱设置如下：

所述流动相的流速为0.5-1.5ml/min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述六氟磷酸钾溶液的pH值为2.0-6.0。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述六氟磷酸钾溶液的浓度为0.005mol/L-0.1mol/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱填料的颗粒粒径为3-5μm；选用色谱柱柱长为150-250mm；所述色谱柱的柱温为15-50℃。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述有关物质为A-G，具体包括以下步骤：

1)分别取待测样品伊索克酸及其相关物质A-G的对照品，用稀释剂溶解制成待测样品及所述各相关物的对照品溶液，分别取待测样品伊索克酸及其各相关物质对照品溶液进样，进入高效液相色谱仪进行梯度洗脱，进入检测器进行检测，确定待测样品伊索克酸及其各相关物的保留时间；

2)取供试品加稀释剂制成供试品溶液，再取稀释剂作为空白溶液，分别取供试品溶液及空白溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，按限度法根据供试品溶液与对照品溶液中杂质的峰面积比较相关物质A-G的含量。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)中供试品溶液的进样量为5-100μl。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述检测器的检测波长为220nm±5nm。