[发明专利]抗寒月季组织培养繁育方法

说明书

本发明涉及一种抗寒月季组织培养繁育方法，解决此品种繁殖速度较慢，增殖系数低的生产问题，该方法包括以下的步骤：1）筛选外植体；2）外植体消毒；3）初代培养；4）增殖培养；5）壮苗培养；6）生根培养；7）移栽驯化。本发明以植株新长出的顶芽或侧芽为外植体，以MS为基本培养基，利用萘乙酸（NAA）、6‑苄氨基嘌呤（6BA），吲哚丁酸（IBA）激素调节，建立抗寒月季再生体系的方法。该发明一个增殖继代周期为4‑5周，增殖倍数控制在6‑8倍，且不受季节的影响，可极大提高种苗繁殖系数，为该品种栽培、应用提供科学、有效的繁殖方法，满足生产需求并进行产业化生产，亦可为其它抗寒月季品种繁殖提供参考。

技术领域

本发明涉及一种抗寒月季的组织培养繁育方法。

背景技术

本发明涉及抗寒月季为蔷薇科（Rosaceae）蔷薇属（Rosa L.）多年生木本花卉，为有刺灌木。叶互生，奇数羽状复叶。花单生或成圆锥花序，花瓣多数，花色丰富艳丽，花期长，除做切花之外，也是做花坛、花境、基础种植及花篱的重要材料，常见在草坪、庭院、公园绿地等处栽植，在园林绿化中应用非常广泛。

但由于东北地区冬季寒冷漫长，夏季生长季短，城市绿化可利用的植物种类少，且绿化成本较高，尤其是黑龙江省，能够露地越冬的品种极少，因此大量繁育能够在我省露地越冬的新品种，对丰富高寒地区园林绿化植物种类具有重要意义，由于此品种月季种子繁殖率低，种子繁殖后代性状易发生变化；分株繁殖速度较慢，增殖系数极低，每年仅能增殖2-4倍，在组培繁殖初期诱导不定芽分化阶段表现出不分化或褐化现象，因此影响了此品种的大批量生产及广泛应用，在园林彩化、绿化大面积应用过程中产业化生产受到限制，此发明方法针对抗寒月季品种组培繁殖过程中诱导不定芽难的问题提出了具体方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗寒月季组织培养繁育方法，以解决种子繁殖率低、变异大，扦插、分株繁殖速度慢，组培初期不定芽有诱导难、褐化等不能满足工厂化育苗需求的问题。本发明的技术方案为：一种抗寒月季组织培养繁育方法，包括以下步骤：

1、一种抗寒月季组织培养繁育方法，包括以下步骤：

1）外植体筛选：春季，选择健康植株萌发出来的嫩芽，用枝剪将带新芽的枝条剪下，作为外植体；

2）外植体消毒：带嫩芽的枝条切成小段，每段带有1-3个芽，置于200mL烧杯中，杯口套上纱网后，采用自来水洗净后，加适量洗洁精在自来水处保持冲洗状态30-40分钟，用滤纸吸干水分；在烧杯中加入质量百分比浓度1‰氯化汞溶液，使外植体材料完全浸泡其中，加入2滴吐温20制成消毒液，轻轻摇晃，6-8分钟后倒掉烧杯中所有消毒液，向烧杯中倒入无菌水冲洗外植体材料4次，无菌水使用遵循先少后多原则，清洗至烧杯表面没有泡沫后，倒掉烧杯中无菌水，连带烧杯放置于超净工作台上；

3）初代培养：将消毒好的外植体材料用已消毒滤纸吸干，切去外植体材料木质化部分及嫩芽展出叶片，插于基本培养基MS上，培养约30天，培养室内温度为22-25℃，一个昼夜中培养室内光照时间为14小时，培养室内黑暗时间10小时，光照强度为1800-2000勒克斯（Lux），Lux为：照度的国际单位；

4）增殖培养：将初代培养的外植体材料，转接于第一培养基上，所述第一培养基构成为：基本培养基MS附加0.01mg/L萘乙酸(NAA)和1mg/L 6-苄氨基嘌呤（6-BA）；蔗糖25g/L；琼脂粉5g/L；pH5.8-6.2；