[发明专利]杂交瘤细胞株及其分泌的具有抑制肿瘤进程活性的单克隆抗体与应用

说明书

本发明公开了一种具有抑制肿瘤进程活性的单克隆抗体5E08和分泌该抗体的小鼠抗人单克隆抗体杂交瘤细胞株Anti‑P3(5E08)20170921 CGMCC No.14723，该杂交瘤细胞株是以人BTN3A3与小鼠IgG2a的融合蛋白BTN3A3‑mIg为免疫原免疫小鼠获得，其分泌的单克隆抗体5E08能够阻断LSECtin与BTN3A3之间的相互作用，从而抑制肿瘤的发生与发展。本发明的单克隆抗体5E08可用于制备抗肿瘤药物，为肿瘤的免疫蛋白治疗提供了一个新思路。

技术领域

本发明属于生物技术领域中的杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体与应用，特别是涉及具有抑制肿瘤进程活性的单克隆抗体和分泌该抗体的杂交瘤细胞株以及该单克隆抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

全球肿瘤发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。目前，对于肿瘤的治疗手段主要包括手术、放疗、化疗、内分泌治疗、靶向治疗及中医药辅助治疗等。困扰肿瘤治疗的根本原因是肿瘤具备一定的耐药性及复发能力。研究表明，导致肿瘤具有耐药性以及复发能力的根本原因在于肿瘤细胞干性的维持与提升，因此，肿瘤细胞干性的靶向性治疗日益成为研究的热点。肿瘤细胞的干性受基因多样性、表观遗传以及肿瘤微环境三个因素调控。鉴于肿瘤微环境因素促进肿瘤细胞干性依赖细胞间交互作用，因此，认识并挖掘促进肿瘤细胞干性的膜蛋白相互作用分子对，筛选抑制该类膜蛋白间相互作用的物质，有望为肿瘤细胞干性的靶向性治疗提供新思路。

肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤微环境中存在的巨噬细胞的总称，是肿瘤微环境中浸润免疫细胞的重要组成部分。已有研究显示，肿瘤相关巨噬细胞能够通过多种途径促进肿瘤进程，包括抑制肿瘤免疫反应、促进肿瘤免疫耐受环境的形成、促进肿瘤组织血管生成等。鉴于肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤进程现象明确，清除肿瘤相关巨噬细胞、促使肿瘤相关巨噬细胞向免疫激活方向转化已成为潜在的肿瘤治疗方法。

LSECtin(Liver Sinusoidal Endothelial Cells lectin)是Ⅱ型跨膜糖蛋白，位于人类19p13.3，是C型凝集素家族的新成员。已知LSECtin蛋白功能包括在黑色素瘤中负调节T细胞免疫反应，促进埃博拉病毒引发的炎性反应，抑制CTL依赖的HBV 病毒清除，促进结肠癌肿瘤细胞肝转移，发明人贺福初、唐丽等之前发现LSECtin可能作为黑色素瘤免疫治疗的靶点(CN104906575A，2014100898325)；治疗和/或预防埃博拉病毒的靶点(CN107019703A，2016100731468)；抗丙型肝炎病毒感染药物作用靶点(CN101152558，2007101755278)；还发现LSECtin或含有LSECtin的融合蛋白可应用于制备抑制癌细胞向肝转移的药物，LSECtin蛋白及其融合蛋白能粘附结肠癌细胞、抑制结肠癌细胞往肝脏的归巢性迁移，成为抗粘附治疗肿瘤肝转移的一个新靶标(CN101732715A，2008102257147)。

发明内容

本发明旨在提供能够阻断LSECtin与BTN3A3之间相互作用的物质，从而抑制肿瘤的发生与发展(抑制肿瘤进程)。该物质为能够阻断LSECtin与BTN3A3之间的相互作用，具有抑制肿瘤进程活性的单克隆抗体。

为得到所述具有抑制肿瘤进程活性的单克隆抗体，本发明首先提出用于制备该抗体的免疫原，其为一种特别设计的融合蛋白，命名为BTN3A3-mIg，是将人BTN3A3与小鼠IgG2a通过连接肽连接后获得的重组蛋白。

具体来讲，所述融合蛋白BTN3A3-mIg是下述氨基酸残基序列之一：

1)序列表中的序列1；

2)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有抗BTN3A3免疫原性的蛋白质；

3)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有抗BTN3A3免疫原性的蛋白质，新蛋白质与序列1同源性达到80％或更高。