[发明专利]一种治疗艾滋病合并淋巴瘤的CAR‑T细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种CAR-T细胞的制备方法，其特征在于，利用CD8+T细胞生产CAR-T细胞，所述CD8+T细胞的来源为脐血T细胞。

2.根据权利要求1所述的CAR-T细胞的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

1)对病人肿瘤细胞进行免疫分型，确认其表面表达；

2)从脐带血中制得脐带血单核细胞，利用人T细胞纯化试剂盒去除肿瘤和其他细胞，获得T细胞，并利用磁珠分离获得CD8+T细胞；

3)利用合适的培养基和刺激条件活化步骤2)获得的CD8+T细胞；

4)根据步骤1)肿瘤细胞的表面表达利用慢病毒将CAR转入到CD8+T细胞，制备CAR-T细胞；

5)利用细胞因子和活化刺激因子，对步骤4)制备的CAR-T细胞进行体外扩增，达到所需要的有效剂量。

3.根据权利要求2所述的CAR-T细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中的脐带血单核细胞的制备方法如下：

a)采集、筛选志愿者脐带血；

b)对所脐带血进行离心，得血浆，并按体积比1:0.9～1.1加入DPBS或生理盐水进行稀释；

c)向所述稀释的血浆中加入淋巴细胞分离液，离心，取单核细胞层进行培养，将培养物再离心，沉淀即为所述脐带血单核细胞。

4.根据权利要求2所述的CAR-T细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中肿瘤细胞的表面表达包括CD19、CD20中的至少一种。

5.根据权利要求2所述的CAR-T细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的刺激条件包括anti-CD3、anti-CD28中的至少一种。

6.根据权利要求2所述的CAR-T细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中扩增是基于anti-CD3，anti-CD28和IL-2、或使用抗原特异性的aAPC和IL-7，IL-15。

7.一种根据权利要求1～6中任一项所述的方法制备的CAR-T细胞。

8.一种含有权利要求7所述的CAR-T细胞的制剂。

9.根据权利要求8所述的制剂，其特征在于，所述制剂还包括药用的稀释剂或赋形剂。

10.一种如权利要求7所述的CAR-T细胞在制备治疗或预防艾滋病合并淋巴瘤药物中的应用。