[发明专利]一种适于抗体纯化的亲和层析介质及应用

权利要求书

1.一种重组蛋白A，其特征在于，所述蛋白A的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种亲和层析介质，其特征在于，所述亲和层析介质包含上述权利要求1所述的重组蛋白A和固相载体，所述固相载体与重组蛋白A偶联。

3.根据权利要求2所述的亲和层析介质，其特征在于，所述固相载体是琼脂糖凝胶、葡聚糖、纤维素、硅胶或带羟基的高分子聚合物。

4.根据权利要求3所述的亲和层析介质，其特征在于，所述固相载体是琼脂糖或葡聚糖凝胶。

5.一种制备权利要求1-4任一所述的亲和层析介质的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)通过化学合成的方法设计合成重组蛋白A基因单体，5‘端Ala-Asp突变成Asn-Val，以形成AclI酶切位点，各重组蛋白A基因单体间以AclI酶切位点相连，第一个重组蛋白A基因单体前端加入与表达载体相连的NcoI酶切位点，6个His和EK酶切位点，最后一个重组蛋白A基因单体末端加入中止密码子TAA和与表达载体pET32a相连的BamH I酶切位点；

(2)将步骤(1)的重组蛋白A基因单体酶切后接入载体pET32a的相应酶切位点之间，再以AclI内切酶酶切，筛选具有氨苄青霉素抗性的转化子，经质粒提取，酶切筛选获得含有6个蛋白A基因单体的葡萄球菌蛋白A的表达载体pET32a-P；

(3)用CaCl2法将步骤(2)的表达载体pET32a-P转化大肠杆菌BL21DE3，筛选、酶切，获得重组转化子BL21DE3/pET32a-P；

(4)将步骤(3)的菌株BL21DE3/pET32a-P进行培养发酵，使其高效表达重组蛋白A，再收集菌体，经分离、纯化得到重组蛋白A产品；

(5)用环氧氯丙烷、氢氧化钠与琼脂糖或葡聚糖凝胶在介质中进行反应，反应产物与步骤(4)获得的重组蛋白A在10-28℃温度下反应15-25小时，反应完后清洗再抽干，获得重组蛋白A凝胶。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)琼脂糖凝胶为5％的交联琼脂糖凝胶。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中，环氧氯丙烷、氢氧化钠与琼脂糖凝胶在DMSO介质中进行反应。

8.根据权利要求2-4任一所述的亲和层析介质在蛋白质分离纯化中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述蛋白质为抗体。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗体为抗EGFR抗体。