[发明专利]马铃薯疮痂病病原菌的分离纯化方法及分子鉴定方法

权利要求书

1.一种马铃薯疮痂病病原菌的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括：

取马铃薯疮痂病病薯的病斑组织，经预处理后得预处理混合物，将所述预处理混合物利用玻璃珠涂布于培养平板上，经培养后得到马铃薯疮痂病病原菌单菌落，完成所述马铃薯疮痂病病原菌的分离纯化。

2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述病斑组织为去除所述马铃薯疮痂病病斑表层后的组织。

3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述预处理的方法为：将所述病斑组织消毒后研磨并离心。

4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述预处理混合物为上清液。

5.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，在取马铃薯疮痂病病薯的病斑组织前，还包括所述马铃薯疮痂病病薯的前处理。

6.根据权利要求5所述的分离纯化方法，其特征在于，所述前处理的方法为：将所述马铃薯疮痂病病薯用清水洗净后，再用医用酒精消毒，并用ddH₂O冲洗，之后将所述马铃薯疮痂病病薯进行干燥处理。

7.一种马铃薯疮痂病病原菌的分子鉴定方法，其特征在于，所述分子鉴定方法包括：

取应用权利要求1-6任一项所述的分离纯化方法得到的马铃薯疮痂病病原菌单菌落，于液体培养基中培养为菌液后，取所述菌液进行PCR反应，并利用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，将所述扩增结果条带与目的条带相符的扩增产物进行测序，得到测序结果；将所述测序结果在数据库中进行序列比对，鉴定所述单菌落是否为马铃薯疮痂病病原菌。

8.根据权利要求7所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述PCR反应为进行16S rDNA序列扩增；所述扩增的引物为：

Primer F:5′-CATTCACGGAGAGTTTGATCC-3′(SEQ ID NO.1)

Primer R:5′-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3′(SEQ ID NO.2)。

9.根据权利要求7所述的分子鉴定方法，其特征在于，在所述测序之前，还包括将所述与目的条带相符的扩增条带回收目的基因片段并连接至克隆载体上，得到连接产物，将所述连接产物转化至感受态细胞，涂布抗性平板，进行鉴定；对鉴定为阳性的菌落进行测序，得到测序结果。

10.根据权利要求1-6任一项所述的分离纯化方法或权利要求7-9任一项所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述马铃薯疮痂病病原菌为链霉菌。